本研究建立了一种用于拟干酪乳杆菌中胞内NADH检测的新方法。该检测方法是基于一种能够对胞内NADH响应的荧光探针而建立,该探针主要功能基因片段Frex是结合对细菌NADH高度敏感的Rex蛋白与黄色荧光蛋白cpYFP而设计出来的。晶体学研究显示该探针能够特异性地与胞内游离NADH结合而引起Frex蛋白发生构象变化,从而暴露出黄色荧光基团；通过荧光酶标仪检测荧光信号强度可得到实时的胞内NADH的水平。为了将该探针用于拟干酪乳杆菌,文中首先成功构建了分别含有Frex和cpYFP片段的重组质粒pMG36e-cpYFP、pMG36e-Frex,并应用电转化方法得到拟干酪乳杆菌重组菌株。通过对比宿主菌与重组菌的发酵过程代谢参数,发现在能够将发酵过程pH控制在稳定水平的5L搅拌式生物反应器内,重组菌株的生长代谢与宿主菌趋势基本相同。此外,研究了该探针在拟干酪乳杆菌中的适用性,通过实验发现拟干酪乳杆菌胞内的pH为6.4,满足该荧光探针的使用条件(pH5-8)。最后,鉴于乳酸发酵过程中普遍存在高渗透压,以渗透压为应激条件进一步验证了该新型NADH检测荧光探针在拟干酪乳杆菌中的适用性。本文所建立的拟干酪乳杆菌胞内NADH检测方法准确性高、特异性强、可能实现发酵过程对胞内NADH的在线实时测量。本研究开启了该荧光探针在细菌界的应用,将为微生物的辅因子工程研究提供强有力的检测工具。