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目的:本研究根据最新的衰老机制以及现代探讨衰老的新方法,采用现代新技术,以临床经验方——壮精合剂(ZJM)作用于肾虚型的初老大鼠,研究壮精合剂对初老大鼠自由基以及细胞凋亡因子等的影响与肾虚衰老的关系,以期为开发新的延缓衰老中药提供依据。 方法:采用自然衰老法建立符合条件的肾虚型初老大鼠模型。选取造模成功的50只雌性SD肾虚型初老大鼠随机分为5组,分别为空白对照组、阳性对照组、ZJM高剂量组、ZJM中剂量组、ZJM低剂量组,每组10只。空白对照组给予生理盐水,阳性对照组给予古汉养生精,ZJM高、中、低剂量组分别给予相应浓度ZJM。各组肾虚型初老大鼠每日灌胃给药1次,连续8W。用半自动生化仪检测各组初老大鼠血清、肝、脑、卵巢中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)值。用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime-PCR)法检测初老大鼠卵巢组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、抑制素-α(INH-α) mRNA的表达。对卵巢进行HE染色,光镜观察卵巢中各种卵泡的数量,并用免疫组织化学染色法检测卵巢组织中Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。 结果:空白对照组大鼠精神不振、嗜睡、怕冷、饮食差,活动量、食量、饮水量少,毛色干枯,月经紊乱,大便较干、夜尿多。与空白对照组比较,ZJM各组与阳性对照组大鼠精神好,活动量、食量、饮水量均增加,皮毛光泽变亮,体重增加,大便干湿适中等;ZJM各组及阳性对照组大鼠血清、肝、脑、卵巢T-SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.01或P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.01); ZJM各组及阳性对照组大鼠卵巢Bcl-2、INH-α mRNA表达值显著升高(P<0.01或P<0.05),Caspase-3 mRNA表达值显著降低(P<0.01或P<0.05);ZJM各组及阳性对照组大鼠卵巢Bcl-2表达明显增强,而Bax表达明显降低;与阳性对照组比较,ZJM高、中剂量组大鼠血清、肝、脑、卵巢T-SOD和GSH-Px活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.01或P<0.05);ZJM高剂量组大鼠卵巢Bcl-2 mRNA表达值显著升高(P<0.05);壮精合剂高剂量组卵巢组织Bcl-2表达有明显增强,而Bax表达有轻微降低。 结论: ①从大鼠精神不振、动作迟缓、嗜睡、怕冷、饮食差,活动量、食量、饮水量少,毛色干枯、脱落,月经紊乱,大便较干、夜尿多等特征来看,本实验初老大鼠模型具有肾虚证的常见临床表现。 ②ZJM可以剂量依赖性(6g/kg-30g/kg)地升高大鼠血清、肝、脑、卵巢T-SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量,升高大鼠卵巢Bcl-2、INH-α mRNA表达值及大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达,降低Caspase-3 mRNA表达值及Bax蛋白表达。ZJM高、中剂量组优于低剂量组,且以ZJM高剂量组效果最佳。 本实验研究结果提示ZJM通过明显提高肾虚型初老大鼠机体抗氧化能力,调节自由基的生成,明显改善细胞凋亡因子Bcl-2、Caspase-3、INH-αmRNA的表达及Bcl-2、Bax蛋白的表达,起到一定的延缓衰老作用。