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目的 本实验观察了大鼠鞘内注射NMDA、MK801和L-MANE前后的缩爪反应潜伏期;在三种疼痛模型上,应用免疫组化的方法,观察了鞘内注射MK801和L-MANE前后大鼠脊髓背角中P物质(substance P,SP)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和FOS的变化,并对NMDA-NO系统在脊髓痛觉过敏机制中的作用进行了探讨。 方法 1.100只大鼠,随机分为10组,分别于鞘内注射:生理盐水10μl(G1,对照组);NMDA 0.01μg(G2组);NMDA 0.1μg(G3组);NMDA 1.0μg(G4组);NMDA 10μg(G5组):L-NAME 250μg(G6组);先注射L-NAME 250μg,10min后,再注射NMDA1.0μg(G7组)。MK801 250μg(G8组);先注射MK801 250μg,10min后,再注射NMDA1.0μg(G9组)。先注射L-NAME 250μg和MK801 250μg,10min后,再注射NMDA 1.0μg(G10组)。给药后每隔5min采用热板测定一次大鼠的缩爪反应潜伏期(HWL),然后换算出大鼠的疼痛指数(AI),直至60min为止。 2.160只大鼠,随机分成16组,每组10只,分别进行如下实验:大鼠左侧后掌皮下注射生理盐水50μl,24h后处死大鼠,取脊髓标本(Fc组);大鼠左侧后掌皮下注射4%甲醛50μl,然后在注射后第1h、4h、8h、12h和24h时,处死大鼠,取脊髓标本(分别记为F1组、F4组、F8组、F12组和F24组);大鼠鞘内注射MK801 250μg,15min后,向其左侧后掌皮下注射4%甲醛50μl,然后在注射后第1h、4h、8h、12h和24h时,处死大鼠,取脊髓标本(分别标记为FM1组、FM4组、FM8组、FM12组和FM24组);大鼠鞘内注射L-NAME 250μg,15min后,向其左侧后掌皮下注射4%甲醛50μl,然后在注射后第1h、4h、8h、12h和24h处死大鼠,取脊髓标本(分别标记为FL1组、FL4组、FL8组、FL12组和FL24组、)。每个脊髓标本均取腰膨大处制成病理切片,观察此处的FOS、CGRP和SP的含量。 3.160只大鼠,随机分成16组,每组10只,分别进行如下实验:只暴露坐骨神经,但不结扎坐骨神经,术后取脊髓标本(CC组);制成标准的慢性结扎损伤模型,在术后第1天、第3天、第5天、第7天和第14天取脊髓标本(分别记为C1组、C3组、C5组、C7组和C14组);鞘内注射MK801 250μg,15min后,制成标准的慢性结扎损伤模型,术后第1天、第3天、第5天、第7天和第14天分别处死,取脊髓标本(分别记为CM1组、CM3组、CM5组、CM7组和CM14组);鞘内注射L-NAME250μg,15min后,制成标准的慢性结扎损伤模型,在术后第1天、第3天、第5天、第7天和第14天分别处死大鼠,取脊髓标本(分别标记为CL1组、CL3组、CL5组、CL7组和CL14组)。每个脊髓标本均取腰膨大处制成病理切片,观察此处的FOS、CGRP和SP的含量。 4.50只大鼠,随机分成5组,每组10只,分别进行如下实验:神经刺激仪只