【摘 要】
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【目的】:通过对细胞因子TGF-β（Transforming Growth Factor-β,TGF-β）信号通路在结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）细胞迁移、上皮间质转化（Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT）中作用的研究,进一步阐明转录因子RUNX1（Runt Related Transcription Factor 1,RUNX
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【目的】:通过对细胞因子TGF-β（Transforming Growth Factor-β,TGF-β）信号通路在结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）细胞迁移、上皮间质转化（Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT）中作用的研究,进一步阐明转录因子RUNX1（Runt Related Transcription Factor 1,RUNX1）促进结直肠癌转移的作用机制。【方法】:通过Western blot及免疫组化技术检测10对结直肠癌患者肿瘤组织及正常肠粘膜组织中RUNX1表达量,明确RUNX1的表达规律;通过Transwell细胞迁移实验,检测在TGF-β诱导下,肠癌细胞株迁移能力的变化情况;使用Western blot或荧光实时定量PCR检测TGF-β刺激下RUNX1、EMT标志物、EMT相关转录因子、基质金属蛋白酶（Matrix Metalloprotein,MMP）表达量的变化;检测使用特异性的siRNA抑制RUNX1后,肠癌细胞株在TGF-β诱导下迁移能力及EMT标志物、EMT相关转录因子表达量的变化。【结果】:（1）结直肠癌患者肿瘤组织较正常上皮组织具有表达更高水平RUNX1的趋势,RUNX1主要定位于癌细胞细胞核内,少量定位于间质细胞细胞核。（2）在10ng/mL TGF-β诱导下HT-29、SW1116、LoVo结直肠癌细胞株均表现出迁移能力的提升（p<0.05）;（3）HT-29及SW1116细胞株在5ng/mL TGF-β诱导24小时及48小时后N-Cadherin mRNA的表达显著提升（p<0.05）,Western Blot检测发现NCadherin、Vimentin蛋白确有提升,提示EMT的发生。此外,MMP-9的蛋白水平亦有提升。SW1116细胞株经TGF-β诱导后SNAI1 mRNA（p<0.05）及蛋白表达水平均显著提升;（4）多株结直肠癌细胞系经5ng/mL TGF-β刺激后RUNX1 mRNA（p<0.05）及蛋白的表达水平显著提升;（5）于SW1116细胞内抑制RUNX1表达后,TGF-β对其迁移能力的促进作用显著减弱（p<0.05）,细胞内SNAI1及N-Cadherin蛋白表达水平在有无TGF-β刺激的情况下均明显减弱。【结论】:RUNX1在TGF-β信号通路中通过调控SNAI1的表达,诱导结直肠癌细胞EMT,从而提升肿瘤细胞迁移能力,促进结直肠癌的迁移。
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