1．互为测交的远缘杂交法与RAPD扩增结合获得作图群体及遗传标记 作为基因组图谱研究的基础，遗传图谱在鱼类遗传育种中具有重要的作用，针对我国养殖鱼类世代间隔时间长，鱼类基因克隆工作相对落后，已克隆和测序的鱼类基因及分子标记数量极少的现状，在哺乳动物单精子PCR分型技术理论的基础上，本研究在国内首次通过鲢和团头鲂的远缘杂交获得作图群体的设想。以100个10碱基随机引物扩增两远缘杂交亲本鲢（Hypophthalmichthys molitrix）、团头鲂（Megalobrama amblycephala）及其杂交后代的基因组DNA。有58个引物的扩增产物在雌、雄两杂交亲本间表现出多态性，多态频率为59.1％；杂交后代中所有扩增条带均来自父本或母本；在所有产生分离的56个RAPD标记中，54个标记经X~2检验表明符合孟德尔分离规律性，偏分离率仅占3.6％。表明以远缘杂交法得到的杂交子代适合作为遗传作图群体。通过互为测交的远缘杂交法，利用RAPD标记进行快速鱼类遗传作图是可行的。 2．以互为测交的远缘杂交后代为作图群体，分离的RAPD片段为遗传标记，绘制鲢、团头鲂遗传连锁图谱 在两个远缘的杂交亲本间，那些在一个亲本呈杂合状态而在另一个亲本中表现为缺失的标记将在F1代中按1∶1的比率分离（两亲本间均为杂合的标记则呈3∶1分离）。各亲本的染色体减数分裂状况通过RAPD标记的变化就可以直接体现出来。经过对100个引物的筛选，共得到了由28个引物扩增而来的50个RAPD标记。在LOD≥3.0，θ≤0.38的条件下将其分群，结果雌性亲本鲢（352.9cM）的5个连锁群上分布有18个标记，而雄性亲本团头鲂（282.5cM）则有14个RAPD标记被定位在4个连锁群上。在似然率≥1000∶1的条件下确定的框架图距分别占各自基因组估计长度的54.1％和45.8％。远缘杂交结合RAPD标记的作图策略不仅可用于鱼类的遗传图谱构建，而且在理论上适合任何杂交可育的杂合亲本的图谱研究。它可以在不需预先得到作图对象的详细遗传背景的情况下，进行快速作图。本图谱构建的成功，为鲢、团头妨染色体上与重要经济性状有关的基因的定位提供了框架结构，为今后其他鱼类的遗传囹谱构建工作提供了理论和实践基础。 3．鱼类RAPD反应如的优化 对鲢和团头妨基因组DNA的RAPD扩增反应中的模板浓度、引物浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析。并在此基础上建立了适于本实验室 RAPD研究的最佳反应体系：25ul反应体系中，含 10InM TriS．HCI（pHS刀），10mM KCI，SInM p）。SO4，ZInM MgCI。，0．05％N’P－40，0．ZInMdNTP，20fig引物，20fig模板，1．SU Taq DNA聚合酶。热循环参数为：95oC预变性3分钟，然后94 ’C变性1分钟，36’C退火1分钟，72C延伸2分钟，共 40个循环，最后 72 ’C延伸 6分钟。