【摘 要】
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背景随着癌症诊断和治疗水平的不断提高,癌症患者的长期生存率显著提高。年轻癌症幸存者的生活质量及生育能力保持越来越受到关注。辅助化疗可能会导致卵巢功能障碍和不孕,干细胞疗法在各种疾病治疗中表现出了潜力,不同类型的干细胞已被用于卵巢功能障碍治疗的研究,经血源子宫内膜干细胞（Menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men SCs）可以无创、周期性地从
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背景随着癌症诊断和治疗水平的不断提高,癌症患者的长期生存率显著提高。年轻癌症幸存者的生活质量及生育能力保持越来越受到关注。辅助化疗可能会导致卵巢功能障碍和不孕,干细胞疗法在各种疾病治疗中表现出了潜力,不同类型的干细胞已被用于卵巢功能障碍治疗的研究,经血源子宫内膜干细胞（Menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men SCs）可以无创、周期性地从废弃的经血样本中获得,具有高增殖能力、低免疫原性和自体移植等优势。目的1.本研究旨在评估Men SCs治疗对顺铂损伤的人卵巢颗粒细胞（Granulosa cells,GCs）的改善作用效果。2.进一步探讨Men SCs治疗对顺铂损伤的人卵巢GCs的改善作用机制。方法1.收集10例年龄小于45岁的女性乳腺癌患者的性激素化验报告,分析化疗对女性激素水平的影响。2.CCK8检测不同浓度顺铂对人卵巢GCs增殖的抑制作用,确定最适浓度,建立顺铂诱导的人卵巢GCs损伤模型。3.通过细胞凋亡检测和活死染色观察顺铂处理不同时间对人卵巢GCs凋亡的影响。4.制备Men SCs条件培养基（Conditioned medium from Men SCs,Men SC-CM）;建立Men SCs与靶细胞非接触式共培养体系。5.CCK8检测Men SC-CM对顺铂处理的人卵巢GCs活性的影响;Men SC-CM和Men SCs非接触式共培养干预后,流式细胞仪检测顺铂损伤的人卵巢GCs凋亡率的变化,Western blot检测顺铂损伤的人卵巢GCs中凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白表达水平的变化。6.在Men SC-CM干预后加入自噬抑制剂MHY1485和Spautin-1,CCK8检测顺铂损伤的人卵巢GCs活性的变化;流式细胞仪检测凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白表达水平的变化。结果1.Men SCs和Men SC-CM处理有效地提高了顺铂损伤的卵巢GCs的生存能力,并显著上调了它们的抗凋亡能力,而且Men SC-CM治疗显示出更好的改善效果。2.Men SC-CM处理显著上调顺铂损伤的卵巢GCs的自噬活性,自噬激活程度与卵巢GCs的生存能力改善呈正相关,而自噬抑制剂显著降低了Men SC-CM对顺铂损伤的卵巢GCs生存能力改善的效果。3.Men SC-CM处理还可以通过激活PI3K/Akt信号通路显著促进正常卵巢GCs的增殖。结论Men SCs治疗可通过上调自噬活性增强了顺铂损伤的卵巢GCs的抗凋亡能力和存活率,通过激活PI3K/Akt信号通路提高正常卵巢GCs的存活率。该结果为Men SCs在改善化疗所致卵巢损伤和延缓卵巢衰老中的临床应用提供了理论和实验依据。
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