降浊颗粒含药血清对体外小鼠肾小管上皮细胞Smads mRNA的影响

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目的:本课题通过将正常家兔灌胃给药后采集的含药血清作用于体外培养的小鼠肾小管上皮细胞的血清药理学方法,观察降浊颗粒含药血清对小鼠肾小管上皮细胞Smads mRNA的影响,从体外细胞分子生物学水平探讨降浊颗粒防治肾纤维化的作用机制。方法:选雄性正常家兔10只,随机分为5组,采用降浊颗粒及贝那普利(洛汀新)灌胃,制备含药血清。①正常组:给予蒸馏水灌胃;②低浓度组:降浊颗粒制成低浓度中药溶液灌胃,降浊颗粒有效剂量为2.1g/(kg·d);③中浓度组:降浊颗粒制成中浓度中药溶液灌胃,降浊颗粒有效剂量为4.2g/(kg·d);④高浓度组:降浊颗粒制成高浓度中药溶液灌胃,降浊颗粒有效剂量为8.4g/(kg·d);⑤贝那普利(洛汀新)组:贝那普利混悬液灌胃,贝那普利有效剂量为0.467mg/(kg·d)。家兔共灌胃7天,于末次灌胃1h后颈动脉插管取血,制备含药血清。小鼠肾小管上皮细胞正常培养,每天换液一次,四天传代一次,待细胞长至70%融合,随机分为六组加入TGF-β1及含药血清干预24小时后进行实验。结果:⑴TGF-β1刺激小鼠肾小管上皮细胞后失去正常的铺路石样形态,轮廓不清晰,经降浊颗粒及贝那普利含药血清干预后,细胞形态有所恢复。⑵降浊颗粒各浓度组及贝那普利组均可抑制Smad2mRNA的表达,但降浊颗粒低、中浓度组抑制Smad2mRNA的表达程度不及贝那普利组,差异有统计学意义(P<0.05~0.01),降浊颗粒高浓度组抑制Smad2mRNA的表达水平与贝那普利组相当,差异无统计学意义(P>0.05);降浊颗粒各浓度组及贝那普利组均上调Smad7mRNA的表达,降浊颗粒低浓度组上调Smad7mRNA表达的水平低于贝那普利组,差异有显著统计学意义(P<0.01),降浊颗粒中浓度组与贝那普利组水平相当,差异无统计学意义(P>0.05),降浊颗粒高浓度组优于贝那普利组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:降浊颗粒各浓度组均可以在一定程度上恢复受损肾小管上皮细胞的形态结构;均可抑制Smad2mRNA的表达,但低、中浓度组不及贝那普利组,高浓度组与贝那普利组作用相当。降浊颗粒各浓度组均可上调Smad7mRNA的表达,但与贝那普利组相比,降浊颗粒低浓度组不及贝那普利组,中浓度组与贝那普利组相当,高浓度组优于贝那普利组。降浊颗粒可能是通过抑制Smad2mRNA的表达,上调Smad7mRNA的表达来发挥防治肾纤维化的作用。
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