【摘 要】
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目的:通过大肠杆菌原核表达系统,优化诱导表达条件,实现重组蓖麻毒素B链蛋白的大量可溶性表达,并提高其纯度。目的是用重组蛋白作为抗原,为制备抗体以及蓖麻毒素疫苗的研究提
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目的:通过大肠杆菌原核表达系统,优化诱导表达条件,实现重组蓖麻毒素B链蛋白的大量可溶性表达,并提高其纯度。目的是用重组蛋白作为抗原,为制备抗体以及蓖麻毒素疫苗的研究提供前期技术支持和理论基础。方法:本实验首先通过PCR扩增出目的基因RTB连接于pMD-18T克隆载体,经序列比对正确后,将目的基因插入到表达载体P300-TrxA-Sumo和pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒P300-TrxA-Sumo-RTB及pGEX-4T-1-RTB。将鉴定构建成功的重组表达质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,建立表达工程菌P300-TrxA-Sumo-RTB/BL21、pGEX-4T-1-RTB/BL21。通过IPTG的诱导,利用单因素试验和正交试验法在不同诱导时间、不同IPTG浓度以及不同温度的情况下对表达条件进行优化,实现对RTB的可溶性表达。通过Ni-Chelating Sepharose亲和层析柱纯化得到纯度相对较高的重组蛋白,最后切去Sumo标签,得到目的蛋白RTB。并通过Western blot和间接ELISA法证明其具有良好的免疫原性。检测RTB作用于RAW264.7细胞的一氧化氮水平。最后用MTT法检测RTB作用于小鼠巨噬细胞时存活情况。结果:成功构建重组表达质粒P300-Trxa-Sumo-RTB以及pGEX-4T-1-RTB。在经过诱导条件的优化后,成功实现重组蓖麻毒素蛋白的大量可溶性表达,表达量分别为11%和8%。通过亲和层析柱纯化得到纯度相对较高的目的蛋白。经过Western blot和ELISA验证目的蛋白具有免疫原性。一氧化氮检测结果显示,RTB组数值较正常细胞组增高,说明RTB能够促进NO的释放,可能作为治疗巨噬细胞相关炎症性疾病的突破口。通过MTT法证明纯化得到的RTB对于小鼠巨噬细胞RAW264.7不具有毒性。结论:经大肠杆菌诱导条件工艺优化后,可实现重组蓖麻毒素B链蛋白可溶性表达。经Ni-NTA、GST标签亲和层析柱纯化后获得具有生物学活性的蛋白,且重组蛋白具有免疫原性并且不具有毒性。
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背景和目的： 乳腺癌在女性常见恶性肿瘤中排名第一。浸润性乳腺癌占乳腺癌患者的 80%左右。但是,我们对于乳腺癌,特别是乳腺非特殊性浸润性导管癌的发生机制研究得还
肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，简称肝癌）是最常见的恶性肿瘤之一，以高转移潜能和低治愈率为特点，传统的治疗方法能够切除瘤组织但不易根治最终导致肝癌复发。淋巴道转移(
高尔基说：“文学的第一要素是语言。”文学本身即是语言的艺术，他是靠语言来塑造形象和反映生活的。文学语言包括人物的语言和叙述人的语言，本文谈的是人物的语言描写方法。 语言描写是对人物的独白、对话及其说话时的神态、动作、语气等的描写，其主要作用是刻画人物性格。我认为，描写人物语言要注意以下三个问题： 一、人物语言要有个性。这是语言描写最基本的、也是最高的要求。语言是人的思想、性格、心理活动的体现，
小组合作学习作为现代教育思想下的一种新的学习方式，现在正被广大的教师运用到自己的课堂教学工作中，合作学习的方式更是语文课程改革的基本理念之一，在这一理念支配下，小组合作学习的形式在小学语文课堂教学中呈现出一派大好形势。然而，在众多课堂的小组合作学习中，我们常常看到的是以“有其形，无其实”的面貌出现，部分老师对小组合作学习仍然存在着认识上的偏差，那就是把小组合作学习停留在学习形式的层面上，好像课堂上
我国古代伟大的教育家孔子提倡“引而不发”的启发式教学，十分重视学生自己在反复诵读的基础上感受品味文章。因此，教师传授给学生的不光是知识，更重要的是引导学生掌握读书方法。那么，课堂上怎样教学生去“读”书呢？ 一、激发学生的阅读兴趣 不少学生因年龄小，玩心重，自制能力差，缺乏良好的读书习惯，即使有时在老师和家长的监督下不得不坐下来，但眼在书本上心不在焉。乌中斯基曾说过：“没有丝毫兴趣的强制性学习，
随着课程改革的不断发展，教师的教学理念有了根本性的转变，教学方式也发生了质的变化，怎样达到事半功倍，师生共进，提高地理课堂教学的实效性就摆在了教师的面前，基础教育课程改革纲要指出有效教学的核心就是教学的效益，即什么样的教学是有效的？是高效、低效还是无效？所谓“有效”，主要是指通过教师在一段时间的教学后，学生所获得的具体进步或发展。教学有没有效益，并不是指教师有没有教完内容或教得认不认真，而是指学生
基础教育阶段，重视运动员身心健康，加强体育基础文化、基本技术、基本技能的学习对于运动员的终身体育发展是十分重要的，这更是培养更高层次的运动员必然要求。因此，提高运动员的训练效率既是新时期健康发展的需要，也是新时期实施素质教育的要求。作为教练，就如何提高运动员训练效率则是一个常说常新的话题。 一、发挥教练自身优势，提高训练的实效性。 面对新形势，以学生为主体的新时期的教育观点下，体育训练是否也能
《语文课程标准》中指出：“培养学生广泛的阅读兴趣，扩大阅读面，增加阅读量，提倡少做题，多读书，好读书，读好书。鼓励学生自主选择阅读材料。”学生应“具有独立阅读的能力，注重情感体验，有较丰富的积累，形成良好的语感。学会运用多种阅读方法。能初步理解、鉴赏文学作品，受到高尚情操与趣味的熏陶，发展个性，丰富自己的精神世界。”在今天这个信息时代，阅读可说是一个人生存所必备的本领,尤其是课外阅读，对小学生起着
在长期的教学实践中，我发现阅读能力强的学生多数学习成绩好，而且学的轻松；阅读能力差的学生多数成绩上不去，学的还挺苦。因此，我在教学时格外重视学生阅读能力的培养。 阅读能力有那些呢？ 1、认读能力。认读不是孤立的读出字音，也伴随着初步的理解。认读时，必须要逐字逐句的读，朗读要读准字音，默读要看清楚每个字每个词。 2、理解能力。它是阅读能力中最基本的成分。较好的阅读能力，不仅指能顺利的读，而且能
《语文课程标准》指出：“培养学生广泛的阅读兴趣，扩大阅读面增加阅读量，提倡少做题，多读书，好读书，读好书。”言下之义，就是要告诉我们，新课程下的语文教学，光靠课内这三四百篇、三四十万字的阅读量是远远不够的，要重视课外阅读，并为学生在课内学习与课外阅读之间架起一座桥梁，由课内向课外过渡，把课内外阅读有意识、有系统地结合起来。 一、得“法”于课内，运用于课外。 新课程下的语文教学，重视语文素养培养