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本实验研究了波尔山羊体细胞核移植中供体细胞的的培养、受体卵母细胞的体外成熟以及重构胚的激活和胚胎的培养,并将重构胚移植给代孕受体。实验采用组织块培养法对波尔山羊耳皮肤成纤维细胞进行原代和传代培养,比较了三种不同的冷冻方法对细胞复苏后再次接种贴壁率的影响。方法一是将细胞置于4℃冰箱平衡1h,-20℃冷冻6h后直接投入液氮,方法二是将细胞于4℃冰箱平衡1h,-20℃冷冻6h后,-80℃冰箱过夜,然后直接投入液氮,方法三是将细胞于4℃冰箱平衡1h,-80℃冰箱过夜,然后直接投入液氮。结果显示,三种冷冻方法的贴壁率依次为2.38%、22.81%和57.33%,相互之间差异极显著(P<0.01)。研究表皮生长因子(EGF)、成熟时间和牛卵泡液(bFF)对山羊卵母细胞体外成熟后第一极体(PB1)排出的影响。结果发现,培养中液添加10~30 ng/ml的EGF对山羊卵母细胞PB1排出率无显著影响(P>0.05);体外成熟17h时PB1排出率为56.37%,与成熟19h(64.69%)无显著差异(P>0.05),而明显低于成熟21～25h实验组(P<0.05),在19～25h间PB1排出率没有显著变化(P>0.05);10%bFF对山羊卵母细胞PB1排出率均无显著影响(P>0.05),但略低于不加bFF组。分别采用离子霉素、6-DMAP协同离子霉素或是6-DMAP加细胞松弛素(CB)协同离子霉素激活山羊重构胚。结果发现,单独使用离子霉素激活,其卵裂率(34.38%)显著低于6-DMAP或是6-DMAP加CB协同离子霉素的激活(34.38%vs69.85%;34.38%vs72.02%,P<0.05);使用6-DMAP或是6-DMAP加CB协同离子霉素激活,二者卵裂率(69.85%vs72.02%,P>0.05)和囊胚率(8.70%vs7.50%,P>0.05)无显著差异。采用胎鼠成纤维细胞单层共培养山羊核移植胚胎,共培养囊胚率为8.70%,而非共培养组没有发育到囊胚。融合后的卵分别平衡培养不同时间再进行激活,发现培养1~3h与3~6h在卵裂率上没有差异(72.58% vs 72.97%,P>0.05),二者显著高于6~9h时的卵裂率(64.40%)(P<0.05)。将所得的491枚胚胎移植到37头自然发情的受体羊内,其中一头受体羊妊娠153天后,经助产产下一活的核移植后代。羔羊产下后8h不幸夭折,经解剖和组织学切片观察,证明羔羊发育良好。