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苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedrovirus AcMNPV)是首个完成测序的杆状病毒,被公认为是杆状病毒的模式种。在杆状病毒生活史中,存在两种表型具有明显差异、但遗传物质完全一致的病毒形态,即出芽型病毒(Budded virus, BV)和包涵体衍生型病毒(Occlusion-derived virus, ODV). Odv-e25是ODV病毒主要的囊膜蛋白编码基因,也是杆状病毒37个核心基因之一,但至今功能未明。本研究旨在研究odv-e25在AcMNPV侵染过程中的作用。主要结论如下：1. AcMNPV odv-e25的表达与分布在所有杆状病毒基因组中都够鉴定到odv-e25同源序列,暗示odv-e25在杆状病毒侵染过程中发挥重要作用。5’RACE分析表明odv-e25转录起始于晚期转录元件ATAAG.病毒感染后12h可检测到odv-e25转录产物,而感染后18h可检测到ODV-E25蛋白的表达,证明odv-e25为晚期基因。免疫荧光结果表明ODV-E25主要分布于感染细胞核的Ring-Zone区域。Western blotting结果显示ODV-E25是BV和ODV共有的结构蛋白。2. AcMNPV odv-e25功能分析通过构建缺失odv-e25的突变病毒验证odv-e25在杆状病毒侵染过程中的功能。结果表明敲除odv-e25影响病毒的复制,出芽型病毒(BV)的产量下降,病毒滴度明显降低。病毒基因组DNA复制试验表明odv-e25缺失后病毒DNA仍然可以完成复制。电镜分析表明敲除odv-e25不会影响核衣壳的形成,然而缺失odv-e25病毒不能产生核内微泡,进而影响核衣壳包膜成熟ODV的形成以及ODV包埋入多角体。3. ODV-E25表达水平对ODV的影响杆状病毒基因在感染过程中程序化表达,之前研究发现基因表达水平的上升或降低会影响病毒表型。为了研究odv-e25的表达水平对杆状病毒侵染的影响,构建了三个分别利用三个启动子表达odv-e25的重组病毒。这三个启动子分别为杆状病毒极早期基因-1(immediately early1, ie-1)启动子,odv-e25自身启动子以及极晚期基因多角体(polyhedrin, ph)启动子。Western blotting分析表明odv-e25在ie-1启动子下表达量最低,在自身启动子下的表达量次之,在多角体启动子下其表达量最高。病毒复制试验、BV的产量以及病毒感染力试验表明odv-e25在ie-1启动子或多角体启动子下表达都能在一定程度修复缺失odv-e25引起的缺陷。电子显微镜分析重组病毒转染后的细胞,发现在ie-1启动子表达odv-e25的病毒可以形成核内微泡,但是核衣壳不能被包膜形成正常的ODV。Odv-e25在多角体启动子以及自身启动子表达的重组病毒感染的细胞,不仅可以形成核内微泡,核衣壳被包膜形成ODV,而且ODV被正常包埋入多角体。