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目的:阐明DNA损伤调节自噬相关蛋白1(DNA damage-regulated autophagy modulator1,DRAM1)在中脑多巴胺能细胞系MES 23.5的过表达对鱼藤酮毒性损伤的保护作用,阐明DRAM1在过表达时对多巴胺能细胞内自噬的影响,进而揭示DRAM1在鱼藤酮PD模型中影响α-突触核蛋白(α-synuclein)蓄积以及多巴胺能神经元生存的分子机制。方法:通过对细胞存活率的检测选择合适的鱼藤酮浓度和作用时间,构建鱼藤酮所致帕金森细胞模型。Western blot法检测α-突触核蛋白和DRAM1的蛋白水平,RT-PCR法检测α-synuclein和DRAM1的m RNA水平。免疫细胞化学实验观察鱼藤酮对MES23.5细胞内α-突触核蛋白聚集的影响。构建鱼藤酮所致帕金森大鼠模型,检测模型大鼠中脑部位α-突触核蛋白和DRAM1的蛋白水平。构建DRAM1过表达模型后使用鱼藤酮,观察细胞存活率的降低情况以及细胞形态学变化。构建DRAM1干扰模型后使用鱼藤酮,观察细胞存活率的降低情况。鱼藤酮作用MES23.5,Western blot法检测p62和LC3 II蛋白水平变化。构建DRAM1过表达模型,观察p62、LC3II和α-突触核蛋白的蛋白水平。构建DRAM1过表达模型后使用鱼藤酮,观察α-突触核蛋白的蛋白水平。DRAM1慢病毒注射到α-突触核蛋白A53T转基因小鼠黑质区,观察α-突触核蛋白的蛋白水平变化。在稳定过表达α-突触核蛋白的细胞株中过表达DARM1,观察细胞内外源性α-突触核蛋白情况。使用自噬抑制剂抑制自噬后,观察DRAM1对α-突触核蛋白的影响。观察鱼藤酮作用对照细胞和稳定过表达DRAM1细胞株后,溶酶体相关指标Cathepsin、NAG和酸性磷酸酶的情况。通过稳定过表达DRAM1细胞株,观察DRAM1对CMA相关蛋白Lamp2A和GAPDH的影响。结果:鱼藤酮对MES23.5细胞有浓度和时间依赖性的损伤作用,据此我们选择25 n M和50 n M的鱼藤酮作用24 h制作帕金森模型。同时,鱼藤酮能够上调MES23.5细胞α-突触核蛋白的蛋白水平,并且是抑制α-突触核蛋白的降解而导致了蛋白的异常堆积。动物实验的数据也进一步证实鱼藤酮对α-突触核蛋白的显著上调作用。有趣的是,我们发现DRAM1在这一过程中也被诱导了。而且,我们进一步发现,过表达DRAM1可以减轻鱼藤酮对MES23.5细胞造成的损伤,对细胞活力的检测和细胞形态学观察实验共同证实了这一结果。而干扰DRAM1的表达则会加剧鱼藤酮对MES23.5细胞的损伤作用。过表达DRAM1的实验结果表明DRAM1能够下调细胞内p62蛋白,上调LC3 II蛋白,同时下调细胞内α-突触核蛋白的蛋白水平。并且过表达DRAM1再给予鱼藤酮处理时,细胞内α-突触核蛋白的上调受到明显抑制。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或巴甫洛霉素A1(Bafilomycin A1)可以有效地阻断DRAM1对α-突触核蛋白的促降解作用。稳定表达细胞株的实验结果表明,过表达DRAM1可以促进细胞内Cathepsin B的激活。同时,过表达DRAM1减少了鱼藤酮造成的溶酶体内NAG的漏出,抑制了鱼藤酮作用下细胞内酸性磷酸酶活力的下降。DRAM1升高了细胞内Lamp2A的蛋白水平,减少了鱼藤酮作用下细胞内GAPDH的堆积,这提示,DRAM1对分子伴侣介导的自噬有调节作用。结论:低剂量的鱼藤酮能损伤MES23.5细胞,并造成细胞内α-突触核蛋白的堆积;DRAM1可以促进细胞内的α-突触核蛋白进行降解,抑制鱼藤酮造成的细胞内α-突触核蛋白的异常堆积,从而缓解鱼藤酮引发的神经毒性;DRAM1是通过增强溶酶体功能及分子伴侣介导的自噬来促进细胞对α-突触核蛋白的清除;以上这些提示了DRAM1可能成为今后神经保护以及帕金森症的治疗中的潜在靶基因。