目的铊及其化合物均有剧毒,急性大量摄入或慢性接触均可引起中毒。铊盐逐渐成为当今国内外投毒或恐怖袭击威胁的主要毒物类别之一,而临床尚无铊中毒标准化治疗方案。结合现有临床病例报道,本研究采用口服普鲁士兰(PB)、血液灌流(HP)以及二者联合治疗(PB+HP)的措施。在建立犬全血和组织中铊含量检测方法的基础上,首先探究血液灌流(HP)对血铊的吸附效率;然后建立犬急性铊中毒模型,分别给予不同治疗措施,观察动物染毒后的症状体征及相关指标的变化,探讨不同措施对急性铊中毒的疗效,为临床救治提供基础实验依据和理论支持。方法1、建立应用石墨炉原子吸收仪检测血铊及组织消解液中铊含量的方法,并完成检验方法学验证;2、建立体外染毒模型并监测:实验采用体重8~10Kg的健康成年比格犬9只,雌雄各半(许可证号为SCXK(京)2011-0007)。不染毒,麻醉处死后经股动脉取血,根据实验动物体质量与血容量的换算公式,以高、中、低剂量硝酸亚铊(Tl NO3)配制成含不同浓度铊的血液,充分模拟血液在体环境,进行HP,以前一组最后一次灌流结束后犬血中所含Tl NO3的总量确定下一组含铊血液样品的配制。应用石墨炉原子吸收仪检测每次灌流前后犬全血铊含量,并对其进行统计分析;3、建立体内染毒模型并监测:实验采用体重8~10Kg的健康成年比格犬24只,雌雄各半(许可证号为SCXK(京)2011-0003,SCXK(京)2011-0007)。随机分为4组(n=6),全部动物给予硝酸亚铊(Tl NO3)犬半数致死剂量(LD50=45mg/Kg)灌胃染毒。随机分为4组:对照组(染毒后给予生理盐水灌胃),PB组(染毒后给予PB灌胃治疗),HP组(染毒后给予HP治疗),以及二者联合治疗组(染毒后给予PB+HP治疗)。参考美国FDA推荐成人急性铊中毒的PB治疗量,根据人类与犬体重和给药剂量的换算公式,确定本实验PB治疗量为467mg/Kg/d;HP每次使用1个炭肾,每次2h,每天1次。各治疗组均前5天内给予不同的处理措施,共观察10天。观察动物染毒后每天的状态变化,采集染毒前和染毒后0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、96h、120h、144h、168h、192h、216h、240h的血液,检测血中的铊含量并行毒代动力学分析;采集染毒前和染毒后12h、24h、48h、96h、120h、144h、168h、192h、216h、240h的血液,监测相应生化指标的变化;留取动物死亡后的脑组织并分区:皮层、海马、纹状体、下丘脑、小脑、脑干、肝脏、肾脏,经过微波消解后,检测其中铊含量。结果1检验方法学考察结果血铊在0~200μg/L范围内,组织消解液中的铊在0~100μg/L范围内线性良好(相关系数分别为0.9996、0.9987);日内精密度(RSD)<8.7%,日内回收率88.2%~117.5%;日间精密度(RSD)<9.8%,日间回收率89.58%~110.0%。2体外染毒监测结果本部分就HP对血铊的吸附能力进行探究。结果表明:高、中、低剂量组每次灌流后血铊浓度(μg/L)均明显降低,高剂量组从453433.33降至56086.67,中剂量组从64510.00降至3187.33,低剂量组从5396.67降至380.23,且高、中、低剂量组4次灌流后总体吸附率分别为87.63%、95.06%、92.75%(F=4.231,P=0.07)。3体内染毒监测结果本部分就不同救治模型的相关指标、参数进行分析,完成不同救治方法疗效的研究。结果如下:3.1血铊含量变化:各治疗组血铊含量较对照组明显降低(组间F=8.296,P<0.001);各治疗组间比较,P均>0.05,差异无统计学意义,但PB+HP组下降趋势最显著,其次为HP组,最后为PB组;对各采血时间点进行统计分析得到,PB+HP起效时间(与对照组相比降低有统计学意义的起始时间)为染毒后6h(P=0.007),HP起效时间为8h(P=0.025),PB起效时间为24h(P=0.008),自治疗措施起效到观察期结束,各治疗组较对照组的降低均具有统计学意义(P均<0.05),各治疗组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。3.2毒代动力学参数变化:各治疗组与对照组相比,t1/2在HP组和PB+HP组、Cmax在PB+HP组、AUC0-t在PB组和HP组以及PB+HP组、MRT0-t在HP组较对照组的降低有统计学意义(P值分别为0.029、0.022、0.034、0.049、0.028、0.031、0.029),余差异无统计学意义(P均>0.05);各治疗组间进行比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。3.3组织中铊含量变化:实验检测的各组织器官中,肾脏中铊含量最高;各治疗组各脑区(皮层、海马、纹状体、下丘脑、小脑、脑干)及肝肾组织中的铊含量均较对照组降低,纹状体中下降最为显著。各治疗组下丘脑、脑干区域的较对照组的降低无统计学意义(P均>0.05),HP组皮层、海马、小脑区域较对照组的降低无统计学意义(P值分别为0.084、0.052、0.057),PB+HP组皮层区域较对照组的降低无统计学意义(P=0.055),余较对照组降低均有统计学意义(P均<0.05);各治疗组之间进行比较,下丘脑、脑干、肝、肾区域仅PB+HP较PB的降低有统计学意义(P值分别为0.038、0.049、0.012、0.013),以上区域余治疗组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);海马、纹状体、皮层区域的各治疗组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。3.4生化指标变化:各治疗组的肝肾功能损害(监测指标:ALT、AST、BUN)均较对照组减轻,PB+HP组各指标的下降趋势最为显著。ALT在PB+HP组、BUN在PB组和HP组以及PB+HP组较对照组的降低均有统计学意义(P值分别为0.043、0.001、0.002、0.001),余差异无统计学意义(P均>0.05);各治疗组间比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。3.5生存趋势变化:各治疗组与对照组相比,生存时间均有延长的趋势,PB组趋势最明显,但差异无统计学意义(P均>0.05);各治疗组间比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论采用石墨炉原子吸收仪检测血液及组织消解液中铊浓度定量准确、灵敏度高、稳定性强,所测样品处理简单,保存时间长,适合批量样本的检测。HP可以稳定、高效地清除血中的铊,4次灌流即可吸附90%以上的铊;且在本研究条件下,HP的吸附效率与血铊含量无关,即使血铊含量低,HP也是有效的;PB、HP以及PB+HP治疗均为急性铊中毒的有效治疗措施,能清除体内毒物,加速毒物排出,减轻肝肾功能损伤,并且可减少其在组织中的分布。综合分析上述治疗措施,PB+HP起效快,清除毒物能力强,减轻铊对组织损伤效果最佳,可能是救治急性铊中毒最为理想的手段。