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目的:探讨重组腺病毒介导的人ING4基因和人IL-24基因对T24人膀胱癌细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制。方法:(1)将已经构建好的Ad空载体腺病毒(Recombinant adenovirus-green fluorescent protein , Ad-GFP )、Ad-ING4单基因重组腺病毒( Recombinant adenovirus-mediated hING4,Ad-ING4)、Ad-IL-24单基因重组腺病毒(Recombinant adenovirus-mediated hIL24 , Ad-IL-24 )和Ad-ING4-IL-24双基因重组腺病毒(Recombinant adenovirus-mediated hIL24 and hING4,Ad-ING4-IL-24)分别经QBI-293A细胞感染多轮扩增后获得高效价重组病毒(2)将浓度为4×107个/ml的T24膀胱癌细胞悬液在裸鼠右前肢腋下皮下注射,建立T24人膀胱癌细胞裸鼠移植瘤模型。(3)将35只荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(PBS组)、空载体对照组(Ad-GFP组)、Ad-ING4单基因治疗组、Ad-IL-24单基因治疗组、Ad-ING4-IL-24双基因治疗组、MMC治疗组和Ad-ING4-IL-24联合MMC治疗组,7组均使用瘤体内注射干预用药,隔日一次,共6次。观测瘤体生长情况,测量肿瘤长径和短径,用公式:肿瘤体积=ab2/2(a为长径,b为短径)计算肿瘤体积,治疗3周后将裸鼠脱颈处死,摘瘤称重,用10%福尔马林溶液固定标本,石蜡包埋,进行HE染色和免疫组织化学检测,免疫组化法检测瘤体细胞因子survivin、Fas、Cox-2、Bcl-2、caspase-3、VEGF、Bax、CD34的表达,并按Weidner的方法检测微血管密度(micro-vessel density,MVD)。结果:(1)获得了高滴度(109pfu/ml)的Ad-GFP、Ad-ING4、Ad-IL-24和Ad-ING4-IL-24。(2)成功构建T24人膀胱癌细胞裸鼠移植瘤,成瘤率达87.5%。(3)治疗后Ad-IL24组、Ad-ING4组和Ad-ING4-IL-24组肿瘤重量分别为0.96±0.05g、0.93±0.06g、0.62±0.04g分别与PBS组(1.73±0.05)g及Ad-GFP组(1.69±0.06)g相比,有显著差异(P<0.05),且Ad-ING4-IL-24双基因组肿瘤重量比两个单基组肿瘤重量明显要轻(P<0.05),Ad-ING4-IL-24+MMC组肿瘤重量(0.32±0.04)g比Ad-ING4-IL-24双基因组(0.62±0.04)g和MMC单纯化疗组(0.56±0.04)g肿瘤重量明显要轻(P<0.05)。Ad-IL24组、Ad-ING4组、Ad-ING4-IL-24组、MMC组和Ad-ING4-IL-24+MMC组瘤重抑瘤率分别为(43±6)%、(45±6)%,(63±5)%、(67±0.05)%和(82±0.07)%;Ad-ING4-IL-24双基因组的抑瘤率比两单基因组的抑瘤率明显增高(P<0.05);Ad-ING4-IL-24+MMC组抑瘤率比Ad-ING4-IL-24双基因组和MMC单纯化疗组的抑瘤率明显增高(P<0.05)。(4)免疫组化显示,Ad-IL-24组肿瘤组织中细胞凋亡相关因子Fas,Bax和caspase-3的表达明显上调,Bcl-2与survivin的表达明显下调,肿瘤血管形成相关因子VEGF和CD34的表达下调,MVD降低(P<0.05);Ad-ING4肿瘤组织中细胞凋亡相关因子Fas、Bax和caspase-3的表达明显上调Bcl-2和survivin的表达明显下调,肿瘤血管形成相关因子CD34和Cox-2的表达明显下调,MVD降低(P<0.05);Ad-ING4-IL-24组肿瘤组织中细胞凋亡相关因子Fas、Bax和caspase-3的表达明显上调Bcl-2和survivin的表达明显下调,肿瘤血管形成相关因子VEGF、Cox-2和CD34的表达明显下调,MVD降低(P<0.05),且较Ad-ING4组和Ad-IL-24组改变更明显,有显著差异(P<0.05)。Ad-ING4-IL-24+MMC组肿瘤组织中细胞凋亡相关因子Fas,Bax和Caspase-3的表达明显上调Bcl-2和Survivin的表达明显下调,肿瘤血管形成相关因子VEGF、Cox-2和CD34下调,MVD降低(P<0.05),且较Ad-ING4-IL-24组和MMC组改变更明显,有显著差异(P<0.05)。结论:(1)Ad-IL24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24和Ad-ING4-IL-24联合MMC均可以显著抑制膀胱癌移植瘤生长。(2)Ad-ING4-IL-24双基因抑瘤效果明显优于单基因,说明Ad-ING4-IL-24有抑癌增效的相加作用。(3)Ad-ING4-IL-24联合MMC抑瘤效果明显优于Ad-ING4-IL-24双基因和单纯MMC化疗,说明Ad-ING4-IL-24具有化疗増敏相加作用,是MMC的理想化疗增敏剂。(4) Ad-ING4-IL-24的抑瘤机制可能和激活细胞凋亡及抑制血管形成有关;Ad-ING4-IL-24的化疗增敏机制可能与因子Fas和caspase-3表达的上调,上调Bax/Bcl-2比及下调survivin和VEGF的表达有关。