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第一部分Six1过表达对人支气管上皮细胞间质转化及纤维化的影响的研究目的:通过上调Six1在人支气管上皮细胞（16HBE）的表达,研究其过表达对16HBE细胞间质转化和纤维化的影响方法:将含有Six1（NM005982）-GV146质粒的甘油菌扩大培养,去内毒素后抽提质粒并测定浓度。体外培养16HBE细胞株并设立实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染Six1（NM005982）-GV146质粒,阴性对照组转染GV146对照空载质粒,空白对照组仅予转染试剂。转染48h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化;采用RT-PCR检测Six1、E钙蛋白、α肌动蛋白、波形蛋白、角蛋白的m RNA的表达;采用Western印迹技术测定Six1蛋白、E钙蛋白、α肌动蛋白、波形蛋白、角蛋白的表达;采用RT-PCR及Western印迹技术检测各组纤维黏连蛋白m RNA及蛋白的表达变化。结果:（1）倒置显微镜下显示:实验组与阴性对照组和空白组相比,细胞从铺路石样向梭形改变,细胞间连接间隙增大;（2）Six1的m RNA及蛋白表达较阴性对照组和空白对照增高,差异具有显著性（F=881.422、78.376,P<0.01）阴性对照组与空白对照组的差异无统计学意义（t=0.002、0.051,P>0.05）;（3）E钙蛋白、角蛋白的m RNA（F=20.370、15.232,P<0.01）及蛋白（F=17.123、10.713,P<0.01、P<0.05）表达降低,差异具有显著性;而α肌动蛋白、波形蛋白的m RNA（F=9.791、36.085,P<0.01）及蛋白（F=44.161、11.397,P<0.01）的表达增高,差异具有显著性,阴性对照组和空白对照组的m RNA（t=0.0.056、0.461、0.0.094、0.277,P>0.05）和蛋白（t=0.894、0.730、0.080、0.185,P>0.05）表达差异无统计学意义。（4）纤维黏连蛋白的m RNA和蛋白的表达在实验组明显升高,差异具有显著性（F=230.003、23.256,P<0.01）,阴性对照组和空白对照组的差别无统计学意义（t=0.376、1.151,P>0.05）。结论:上调Six1表达可使16HBE细胞形态发生改变,细胞间隙增大,上皮细胞标志产物减少,间质细胞标志物增多,纤维黏连蛋白表达增多,16HBE细胞发生EMT和向成纤维细胞转化的改变。第二部分Six1通过TGFβ1/Smad信号通路调节人支气管上皮细胞间质转化及纤维化的研究目的:通过调控TGFβ1/Smad信号通路,进一步探究Six1对人支气管上皮间质转化及纤维化的作用机制及TGFβ1/Smad信号通路在其中的作用。方法:（1）将含有Six1（NM005982）-GV146质粒的甘油菌扩大培养,去内毒素后抽提质粒并测定浓度。体外培养16HBE细胞株并设立实验组（转染Six1（NM005982）-GV146质粒）、阴性对照组（转染GV146对照空载质粒）和空白对照组（仅予转染试剂）。转染48h后Western印迹技术测定各组TGFβ1以及磷酸化Smad2蛋白;（2）将转染了Six1（NM005982）-GV146质粒的细胞进一步分为抑制剂组及Six1对照组,其中抑制剂组在转染6小时后予以含TGFβ1通路抑制剂10nmol/L的10%FBS培养基,Six1对照组仅予以更换10%FBS的1640培养基。加入抑制剂24h后采用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化;采用Western blot技术测定各组E钙蛋白、α肌动蛋白、TGFβ1、磷酸化Smad2蛋白及纤维黏连蛋白的表达变化。结果:（1）上调Six1表达后,实验组TGFβ1以及磷酸化Smad2蛋白表达增高,差异具有显著意义（F=63.323、39.948,P<0.05）,而阴性对照组的TGFβ1、磷酸化Smad2与空白对照组间差异无统计学意义（t=0.859、0.445,P>0.05）。（2）抑制TGFβ1信号通路后,经倒置显微镜观察发现:抑制剂组的细胞间隙较Six1对照组明显降低,细胞形态更接近于鹅卵石样单层细胞;Six1对照组的细胞呈梭形改变,细胞间连接不紧密,细胞间隙大。（3）与Six1对照组相比,抑制剂组的TGFβ1以及磷酸化Smad2蛋白表达明显降低（t=4.454、t=7.104,P<0.05）,差异具有统计学意义;E钙蛋白的表达较未抑制组明显增多（t=5.367,P<0.05）,而α肌动蛋白的表达明显减少（t=7.126,P<0.05）,差异具有统计学意义（4）纤维黏连蛋白的表达在TGFβ1通路抑制后明显得到了降低（t=9.422,P<0.05）,差异具有统计学意义。结论:（1）在16HBE细胞中上调Six1表达,TGFβ1/Smad信号通路表达增高。（2）进一步抑制TGFβ1/Smad信号通路后细胞的EMT和纤维化相关的改变明显得到抑制。Six1对16HBE细胞发生EMT和纤维化相关改变可能是通过TGFβ1/Smad信号通路进行调控的。