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实验目的：癫痫是多种原因导致的脑神经元高度同步化异常放电的临床综合征,是神经系统常见疾病。颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy, TLE)是难治性癫痫的主要类型,其发病机制至今尚未完全阐明。目前认为海马硬化是颞叶癫痫的一个显著的病理特征,主要表现为海马萎缩、神经元脱失、胶质细胞增生、齿状回颗粒细胞弥散增宽和苔藓纤维出芽等。神经元异常放电是癫痫发病的电生理基础,它与离子通道蛋白和神经递质异常有关。异常放电通过反复的突触联系引起异常电位的连续传播,从而将这种异常放电广泛投射到大脑皮质,引起不同形式的痫性发作。由此看来,海马和脑皮质的病理改变与颞叶癫痫的发作密切相关。近年来,蛋白质组学技术的出现和应用为我们更好的发现组织细胞的蛋白水平变化和探索疾病发病机制提供了用力的工具。蛋白质组学是一门以蛋白质为研究对象,在蛋白质水平上对疾病机理进行研究的技术,已成为当前生命科学研究的重点。本实验运用比较蛋白质组学技术,通过对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠这一公认的颞叶癫痫模型的海马组织和脑皮质中差异表达的蛋白质进行研究,建立颞叶癫痫大鼠海马组织和脑皮质蛋白质的双向荧光差异凝胶电泳图谱,分析海马和脑皮质蛋白质的表达变化并最终鉴定差异蛋白,以进一步探索TLE的发病机制,为寻找新的治疗靶点提供依据。实验方法：1.建立颞叶癫痫大鼠模型,成年健康雄性Wistar大鼠14只,体质量200～250g,由山东大学实验动物中心提供。分为癫痫组8只,对照组6只。癫痫组给予氯化锂127mg/kg腹腔注射,24h后腹腔注射匹鲁卡品30mg/kg,在匹鲁卡品注射前30min给予阿托品lmg/kg腹腔注射,以拮抗外周胆碱能效应。出现癫痫持续状态90 min后给予安定lOmg/kg腹腔注射终止发作。对照组给予相同剂量的生理盐水腹腔注射。2.采用双向荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)技术分离大鼠海马组织和脑皮质,Typhoon多功能激光扫描成像系统扫描凝胶,ImageMaster软件分析图像,筛选出差异表达的蛋白质斑点。3.运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectro- metry, MALDI-TOF-MS)对差异蛋白质点进行分析,获得肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting, PMF),利用Mascot软件检索蛋白质数据库,确定差异蛋白质。结果：1.颞叶癫痫大鼠模型：匹鲁卡品致痫后按照Racine大鼠癫痫发作分级标准判定其发作程度,发作达到3-5级的大鼠视为诱导成功,表现为点头、面部肌肉抽搐、肢体阵挛和跌倒等。癫痫组有两只死亡,在实验组中剔除。对照组无死亡。2.大鼠海马组织经比较发现有48个蛋白质点存在表达差异,通过数据库检索最终确定19种差异蛋白质,其中13种表达上调,6种表达下调。大鼠脑皮质经比较发现43个蛋白质点存在表达差异,通过数据库检索最终确定15种差异蛋白质,其中8种表达上调,7种表达下调。3.对鉴定出的蛋白质进行功能分类,发现这些蛋白与神经损伤、细胞骨架重塑、细胞代谢和氧化应激等有关,推测它们在TLE发病机理方面起着重要作用。结论：本实验成功建立了颞叶癫痫大鼠海马组织和脑皮质的双向荧光差异凝胶电泳图谱,经比较发现了与TLE相关的差异蛋白质点,并最终确定蛋白质。这些差异表达的蛋白质可能与TLE的发病机制有关。