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WRKY转录因子是高等植物中最大的转录因子家族之一,它可以与靶基因的顺式作用元件互作后对目标基因进行调控。WRKY转录因子可以调控植物的生长发育、生物学代谢以及抗逆过程,研究发现过表达WRKY基因可以提高植物对于干旱、盐碱、高温的耐受性以及对病菌的耐受性,但目前对于马铃薯WRKY转录因子介导的信号转导研究较少,因此本研究通过构建马铃薯WRKY基因的过表达与干扰表达载体以及酵母双杂技术筛选与WRKY基因互作的蛋白,来研究WRKY基因的生物学特性和响应马铃薯抗干旱胁迫的机制,为进一步研究WRKY基因在马铃薯抗干旱胁迫方面的代谢途径提供理论基础。主要研究结果如下:1.马铃薯StWRKY57基因的生物信息学分析:StWRKY57基因位于8号染色体上,CDS区长762 bp,含有4个外显子,该基因共编码253个氨基酸,其编码的蛋白相对分子量为28.72 kDa,理论等电点为8.84,不稳定系数为57.47,脂肪系数为75.53,总平均亲水性为-0.653,说明该蛋白为疏水性蛋白且该蛋白具有跨膜结构。利用同源重组法成功构建瞬时表达载体pEGFP-WRKY,并使用农杆菌介导的转化法转染烟草,通过激光共聚焦扫描显微镜观察到荧光分布在细胞核中。2.利用双酶切法和质粒重组法构建pCPB-WRKY57过表达载体和pCPB121-amiR-WRKY57干扰表达载体,遗传转化获得转基因植株,利用qRT-PCR技术分析StWRKY57在转基因植株中的表达量,过表达转基因植株较非转基因植株StWRKY57基因的表达量均明显上调,过表达株系OE1-6中分别上调3.46、1.66、1.59、3.29、3.60和1.58倍;人工miRNA干扰转基因植株与非转基因植株相比StWRKY57基因的相对表达量均为下调,转化株系RNAi1-6分别下调26%、69%、42%、67%、68%和44%。3.利用双酶切和质粒重组法构建诱饵载体pGBKT7-WRKY,并导入Y2HGold酵母菌株中,进行毒性和自激活检测,显示该诱饵蛋白不具有毒性和自激活能力,可以进行下一步的筛选。4.使用Mating法筛选与pGBKT7-WRKY互作的蛋白,总共获得14个阳性杂交,测序结果发现这14个阳性克隆为同一个重复基因即谷氨酰胺合成酶基因。