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第一部分ASPP2及预测mi RNA在宫颈癌组织中的表达目的:检测ASPP2和预测靶mi RNA在宫颈癌组织和子宫肌瘤组织中的表达情况。方法:采用RT-PCR的方法对55例宫颈癌组织和作为对照的23例子宫肌瘤组织中ASPP2 m RNA水平进行检测。利用生物信息软件预测ASPP2可能的靶mi RNA,并用RT-PCR的方法在组织中检测mi RNA的m RNA表达水平。结果:宫颈癌组织中ASPP2 m RNA相比对照子宫肌瘤中的表达水平明显降低,P<0.01,且结合临床资料分析,宫颈癌I期组织ASPP2 m RNA水平相比II-III期的组织中高,P=0.0361,差异具有统计学意义。使用生物信息软件预测ASPP2可能的相关靶mi RNA有mi RNA-370、mi RNA-221、mi RNA-222以及mi RNA-205。宫颈癌组织中检测mi RNA-221的表达水平结果显示,宫颈癌组织中的mi RNA-221m RNA相比对照组高,P=0.026,其差异有统计学意义。结论:ASPP2在宫颈癌中表达水平比非癌组织低,并且随着病变情况加重而降低,提示我们ASPP2可能在宫颈癌的发生发展中起重要作用。作为有可能是ASPP2靶mi RNA的mirna-221在宫颈癌中表达升高,有可能在宫颈癌中参与调控作用。第二部分宫颈癌中mi RNA-221对ASPP2调控关系的验证目的:通过构建ASPP2 3’UTR荧光素酶报告基因质粒,验证宫颈癌中mi RNA-221对ASPP2的靶向调控关系。方法:构建好ASPP2 3’UTR荧光素酶报告基因质粒后,同时向宫颈癌细胞Siha中转染ASPP2 3’UTR荧光素酶报告基因质粒和mi RNA-221 mimics,采用荧光素酶报告基因试剂盒检测荧光强度变化。结果:ASPP2 3’UTR荧光素酶报告基因质粒构建成功,报告基因结果显示转染mi RNA-221 mimics后荧光强度降低近40%。用western-blot检测转染mi RNA-221mimics前后细胞内ASPP2蛋白表达水平确定mi RNA-221能下调ASPP2蛋白水平。结论:mi RNA-221能够直接与ASPP2 3’UTR结合从而下调ASPP2.第三部分ASPP2在宫颈癌细胞中的功能以及mi RNA-221-ASPP2途径的调控作用目的:研究宫颈癌细胞中ASPP2的细胞学功能,以及在mi RNA-221调控作用下细胞学功能变化。方法:培养宫颈癌细胞Siha,转染ASPP2过表达载体,利用CCK8、细胞划痕实验、transwell等研究ASPP2在宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭性等各方面的功能影响。同时转染ASPP2过表达载体和mi RNA-221 mimics,研究mi RNA-221通过对ASPP2的调控对宫颈癌细胞学功能的影响。结果:当ASPP2过表达时,宫颈癌细胞Siha的CCK8吸光度结果相比正常Siha低,即细胞数目少于正常Siha组;细胞划痕宽度相对正常Siha组相对更宽;transwell小室膜染色发现ASPP2过表达组通过小室膜的数目急剧下降。在ASPP2过表达同时用mi RNA-221 mimics调控,发现CCK8中细胞数目处于ASPP2过表达组和正常Siha组之间,细胞划痕宽度相对过ASPP2表达组稍窄,transwell染色细胞数高于ASPP2过表达组低于正常Siha组。结论:ASPP2在宫颈癌中有抑癌作用,能够抑制癌细胞增殖,降低癌细胞侵袭性,而对癌细胞的迁移作用有待进一步研究。在mi RNA-221对ASPP2调控作用下,在宫颈癌中可以降低ASPP2的抑癌作用,相对提高癌细胞增殖,升高癌细胞的侵袭性。