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表面蛋白是乳酸杆菌发挥益生作用的主要成分之一，因其种类和功能的多样越来越受到人们关注。研究表明表面蛋白是乳酸杆菌起黏附作用的主要因子，而黏附作用对保护肠道起决定作用。近几年对脱离菌体的表面蛋白功能及其保护肠道细胞的作用机理研究较少，因此本课题利用纯化后的表面蛋白对保护上皮细胞的保护作用进行研究。本课题研究了不同培养条件下Lactobacillus paracasei subsp. paracaseiM5-L和Lactobacillus casei Q8-L表面蛋白表达量，经盐析法分离纯化，SDS-PAGE法证明两株菌均在45kDa处有单一条带，经液质鉴定M5-L分离出来的蛋白主要为表面抗原，Q8-L分离出来的蛋白主要为延伸因子Tu。用Sulfo-NHS-Biotin(l.0mg/mL)对HT-29细胞进行标记，与电泳分离的表面蛋白进行杂交，鉴定出M5-L和Q8-L的表面蛋白与细胞膜受体特异性结合的表面蛋白，具有黏附性。原子力显微镜观察到未去表面蛋白的M5-L和Q8-L的表面平滑均匀，而去掉表面蛋白的M5-L和Q8-L的表面相对粗糙和不均匀；测得M5-L和Q8-L的黏附力为1.41nN和0.48nN，去掉表面蛋白的M5-L和Q8-L黏附力为0.70nN和1.28nN；测得M5-L和Q8-L的相对弹力为18.82和27.94，去掉表面蛋白的M5-L和Q8-L的相对弹力为27.31和9.64。分别用排除、竞争和取代实验研究表面蛋白抑制致病菌S. sonnei黏附HT-29细胞的作用，得出M5-L和Q8-L的表面蛋白浓度分别为25μg/mL和400μg/mL时效果最好，抑制率为20%~50%。采用Hoechst33258法对不同处理的HT-29细胞进行染色，采用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。只加入S. sonnei的细胞凋亡率为100.00%、只加M5-L表面蛋白的细胞凋亡率为5.00%、只加Q8-L表面蛋白的细胞凋亡率为10.67%、同时加入S. sonnei和M5-L表面蛋白的细胞凋亡为37.67%、同时加入S. sonnei和Q8-L表面蛋白的细胞凋亡率为47.67%。说明表面蛋白对S. sonnei诱导的细胞凋亡具有保护作用。采用免疫荧光组化法观察细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达部位及分布变化表明M5-L和Q8-L的表面蛋白均在一定程度上抑制S. sonnei对上皮细胞上ZO-1和Occludin蛋白破坏。