论文部分内容阅读
葫芦科作物有多种种传病毒,植物检疫部门如何同时快速检测这些病毒的问题有待解决。番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)是葫芦科作物的种传病毒之一,本研究开展了葫芦科作物种子上的PRSV的分子检测研究,可以为解决上述问题提供借鉴。 以海口、扶绥、郑州、漳州等地采集回来的叶片样品为材料,首先通过双抗体夹心酶联免疫吸附分析(DAS-ELISA)的方法对所采集的叶片样品进行检测。在获得初步结果的基础上利用RT-PCR的方法进行检测。在确认叶片所携带的病毒为PRSV后,利用梯度PCR的方法及调整Taq DNA聚合酶浓度的方法确认退火温度为56℃的条件下使用2U的Taq酶可获得最佳RT-PCR检测结果。在优化后的PCR条件下,以西葫芦种子为样品,采取液氮研磨及TRIzol的方法提取PRSV的总RNA并进行检测,同时播种获得叶片后用DAS-ELISA的方法进行验证。最终建立一套可以直接从种子中检测PRSV的RT-PCR检测方法,为检疫部门提供了可以参考的快速检测番木瓜环斑病毒的分子方法。 已有的方法主要针对发病叶片的检测,本研究建立了基于种子的葫芦科作物PRSV的分子检测方法,很有实用前景。