论文部分内容阅读
目的:对玻片表面六种不同修饰方法进行比较,探讨制备蛋白质微阵列的合适的玻片表面修饰方法;研究分别采用荧光素和胶体金为检测信号制备TORCH感染检测蛋白质微阵列。方法:以玻片为基质,采用六种不同方法对玻片表面进行修饰,对其接触角进行测量,采用原子力学显微镜对其表面进行表征,通过将不同浓度的人IgM点样于修饰后的玻片制备蛋白质微阵列,比较不同修饰方法对蛋白质的固定效率,以及检测的线性范围、背景等;采用玻片表面修饰琼脂糖膜制备蛋白质微阵列,以生物素标记二抗,利用生物素和链霉亲和素的强大亲和力,检测血清中TORCH IgM抗体;抗原点样于被琼脂糖膜修饰的玻片表面,将胶体金标记的抗体和微阵列进行孵育,采用银加强放大微阵列信号,肉眼观察或普通的平板扫描仪记录结果。结果:测量修饰后的玻片的接触角,对玻片表面进行表征,对蛋白质的固定效率、固定的效果进行综合分析,琼脂糖修饰玻片的表面接触角较大,其表面不仅有多孔结构,而且有一定厚度,结合蛋白质分子的能力最大,其点的变异度较小,没有拖尾现象,点较圆润,背景较低;以荧光为检测信号,基于生物素–链霉亲和素系统制备的TORCH感染检测蛋白质微阵列,IgM的最低检出量为0.25pg,蛋白质微阵列和ELISA法同时对CMV、RV、TOX和HSVⅡIgM抗体总的检测诊断符合率为97.1%;采用免疫金银染色法制备的TORCH感染检测蛋白质微阵列,IgM的最低检出量为12.5pg,微阵列和ELISA法同时对CMV、RV、TOX和HSVⅡIgM抗体总的检测诊断符合率为93.3%。结论:琼脂糖修饰的玻片是一种理想的制备蛋白质微阵列的表面修饰方法。分别采用荧光和免疫胶体金为检测信号制备的TORCH感染检测蛋白质微阵列,具有高信息通量、低成本、制备与检测快速简单的优点,展示了良好的应用前景。