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【目的】肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国常见恶性肿瘤。诱发肝癌的因素很多,其中病毒性肝炎、肝硬化是重要病因。化疗是肝癌主要治疗手段,肝癌细胞对抗癌药物产生耐药现象是导致化疗失败的主要原因,是肝癌临床治疗中的一大难题。肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)由多种机制调控,研究认为, MDR表型的出现与P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的过表达相关,P-gp发挥着药物泵功能,将药物泵出细胞膜外。蛋白激酶C ( protein kinaseC,PKC)的同工酶,特别是PKCα,对肿瘤细胞MDR表型的出现或维持可能起着决定性作用。因此研究PKCα对肝癌细胞的抗癌药物敏感性的影响,有助于我们了解肝癌耐药的发生机制,为克服肝癌临床治疗中的MDR提供实验依据。【方法】1.将体外合成的载有目的片段的DNA链整合进反转录病毒载体。2.将反转录病毒载体热转化入大肠杆菌中培养,药物筛选阳性克隆后,提取无内毒素质粒。3.按一定比例将无内毒素质粒与病毒包装细胞混合后,在电转仪下,将反转录病毒载体电转入病毒包装细胞。4.药物筛选2星期后,将阳性克隆扩大培养。5.用病毒上清液感染人HepG2细胞。6.药物筛选后,挑选阳性克隆细胞扩大培养,并将其与PMA处理的HepG2细胞及未受干预的HepG2细胞做药物敏感性及生长速度比较。【结果】1.Westernblot显示:与对照组(未受干预的HepG2细胞)相比,感染siRNA片段者PKCα的表达显著减少;而感染空载体者无显著变化; PMA可以刺激细胞内PKCα的表达。2.siRNA和PMA对HepG2细胞生长速度的影响实验表明,与对照组相比,转染siRNA的HepG2细胞生长速度明显减慢;PMA处理组速度略快;空载体组无显著变化。3.药物杀伤结果:经过6次反复MTT后,计算各组对表阿霉素的IC50值。对照组为10.2200±0.7805;转染siRNA组6.4450±0.8549;转染空载体组10.1500±0.9343,PMA处理组11.5400±1.3647。LSD-t检验结果显示,与对照组相比,siRNA处理组、PMA处理组对表阿霉素的药物敏感性变化均有统计学意义上的差异(P<0.05),而空载体组与HepG2组比较无统计学意义上的差异。【结论】1.实验中所采用的siRNA片段对细胞内PKCα的表达有明显的干扰作用,极大地降低了HepG2细胞中PKCα的表达。2.细胞内PKCα表达升高时,肝癌细胞对药物的敏感性减弱,耐药性增强;当细胞内PKCα降低时,肝癌细胞对药物的敏感性增强,耐药性减弱。提示抑制肝癌细胞中PKCα表达,可以降低肝癌细胞对药物的耐受性,增强化疗效果。