目的:恶性肿瘤不受控制的复发和转移是恶性肿瘤高死亡率的重要原因之一。波形蛋白（vimentin）与肿瘤细胞恶性程度呈正相关。vimentin在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞中也呈高表达,在结直肠癌的转移和预后中发挥关键作用。然而,vimentin在CRC进展中的分子机制尚不完全清楚。启动子是调控vimentin表达所必须的,启动子本身并不控制基因的活动,而是与转录因子结合来控制基因的活动。但是,目前vimentin启动子的具体转录调控机制尚未明确。本研究的主要目的是探究vimentin启动子在结直肠癌中的具体转录调控机制,并进一步的研究vimentin启动子的转录调控机制对CRC细胞的生物学功能的影响。方法:1.通过PCR法构建vimentin启动子全长及各截短片段载体,采用双酶切法和DNA测序检测重组质粒是否构建成功。2.通过荧光素酶双报告基因系统检测vimentin启动子全长及各截短片段质粒的相对荧光素酶活性以及AP-1对vimentin启动子的相对荧光素酶活性的影响。3.通过生物信息学分析和突变实验分析与vimentin启动子结合的关键转录因子。4.通过Western blot、Real-time PCR方法检测AP-1和vimentin在结直肠癌细胞中的表达量。5.通过凝胶迁移实验（EMSA）和染色质免疫沉淀实验（ChIP）检测AP-1与vimentin启动子+785nt～+1085nt区域在体内外是否能相互作用。6.构建AP-1的慢病毒过表达载体和AP-1过表达后vimentin沉默载体。通过western blot检测AP-1和vimentin在CRC细胞中的蛋白表达。7.通过细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、细胞迁移实验和细胞侵袭实验检测AP-1过表达和AP-1过表达vimentin沉默后,对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。8.通过构建裸鼠皮下成瘤模型和免疫组化实验检测AP-1在体内对vimentin表达和肿瘤生长的影响。结果:1.将vimentin启动子全长及各截短片段载体进行KpnI和XhoI双酶切验证,双酶切实验结果显示,重组质粒构建成功。2.双报告荧光素酶检测系统检测结果显示,质粒pGL4.10-1085相对于完整启动子区域（核苷酸-121nt～+1850nt）具有最大的荧光素酶活性,+785nt～+1085nt区域对vimentin启动子的完整活性至关重要。3.通过生物信息学分析、过表达AP-1和敲低AP-1检测AP-1对vimentin启动子和vimentin表达的影响,实验结果显示,AP-1能影响vimentin启动子的相对荧光素酶活性和vimentin的表达。4.凝胶迁移实验和染色质免疫沉淀实验结果显示,AP-1能够在体内外识别并特异性的结合vimentin启动子。5.通过细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、细胞迁移实验和细胞侵袭实验结果显示,AP-1可以通过vimentin来影响CRC细胞的增殖、迁移和侵袭。6.动物实验和免疫组化结果显示,AP-1能影响vimentin在体内的表达,AP-1还能通过调节vimentin促进肿瘤生长。结论:1.AP-1是结直肠癌细胞中vimentin启动子上最重要的转录因子结合位点。在结直肠癌细胞中,AP-1能调控vimentin的转录和翻译。2.AP-1通过激活vimentin影响体外CRC细胞的迁移、侵袭和体内肿瘤的生长。