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目的:在育龄期妇女群体中,多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)属于一种常见的内分泌紊乱综合征,多数患者随着病程的进展会出现高胰岛素血症和胰岛素抵抗。有研究发现miR-320参与脂肪组织中胰岛素敏感性的调节,过表达可降低胰岛素敏感性而导致IR的发生。由此可知miR-320表达异常和功能失调在PCOS患者IR的发生、发展中起着重要作用。此外研究证实PI3K/AKT信号通路在PCOS胰岛素抵抗中发挥十分重要的作用。因此本研究拟探讨miRNA-320通过PI3K/Akt信号通路调控多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用。方法:(1)采用来曲唑灌胃构建PCOS大鼠模型,同时设对照组,连续检测对照组模型组大鼠阴道涂片,根据检测结果判断大鼠处于何种动情周期,并分别绘制两组大鼠动情周期变化曲线图比较,采用HE染色检测和比较大鼠卵巢组织形态学特征,采用酶联免疫吸附法检测两组大鼠血清性激素(LH、FSH、T、E2)表达水平。(2)提取与培养大鼠卵巢颗粒细胞,将miR-320 mimic、miR-320 inhibitor分别转染卵巢颗粒细胞,同时设对照组,采用RT-PCR法检测和比较各组卵巢颗粒细胞转染后miR-320 mRNA表达水平,采用western blot法检测和比较各组卵巢颗粒细胞转染后PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27)表达。(3)将24只Wistar大鼠根据数字表法随机分为三组,miR-320 mimic组、miR-320 inhibitor组和对照组,每组各8只,均PCOS造模,同时miR-320 mimic 组 Wistar 大鼠尾静脉注射 miR-320 mimic(浓度为 2mg/kg),miR-320 inhibitor组Wistar大鼠尾静脉注射miR-320 inhibitor(浓度为2mg/kg),对照组则注射同体积生理盐水溶液,共注射30d。采用HE染色检测和比较各组卵巢组织,采用放射免疫法检测和比较各组FINS、TG、FPG血清指标及HOMA-IR,采用western blot法检测和比较各组卵巢组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达水平。结果:(1)对照组大鼠动情周期变化具有明显的规律性特点,而模型组大鼠始终处于动情周期,无明显的规律性特点,通过光学显微镜观察,对照组大鼠卵巢组织切片中可见黄体和处于不同发育阶段的卵泡组织;模型组大鼠卵巢组织的解剖结构呈病理性改变,卵巢内囊状扩张卵泡明显增多,而黄体、处于发育阶段的卵泡组织数量则明显减少,模型组大鼠血清LH、FSH、T表达水平均明显高于对照组(P<0.05),而血清E2表达水平明显低于对照组(P<0.05)。(2)miR-320 mimic组卵巢颗粒细胞miR-320 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05),而miR-320 inhibitor 组 miR-320 mRNA 表达水平明显低于对照组(P<0.05),miR-320 mimic 组 PI3K/Akt 信号通路蛋白(PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27)表达水平明显低于对照组(P<0.05),而miR-320 inhibitor组PI3K/Akt信号通路蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05);(3)对照组可见较多处于早期发育的小卵泡及闭锁卵泡,囊状扩张表现较为显著,颗粒细胞层减少,甚至消失,黄体较少,卵巢呈典型多囊样改变;miR-320 mimic组小卵泡及闭锁卵泡较对照组明显增多,未见明显颗粒细胞层及黄体;miR-320 inhibitor组小卵泡及闭锁卵泡较对照组明显减少,可见明显颗粒细胞层及黄体,部分卵巢呈典型多囊样改变。各组TG、FPG血清指标表达水平比较无显著差异性(P>0.05),miR-320 mimic组血清FINS表达水平及HOMA-IR明显高于对照组(P<0.05),而miR-320 inhibitor组血清FINS表达水平及HOMA-IR明显低于对照组(P<0.05)。miR-320 mimic组卵巢组织PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27)表达水平明显低于对照组(P<0.05),而miR-320 inhibitor组卵巢组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:来曲唑成功构建了 PCOS大鼠模型,将大鼠卵巢颗粒细胞原代培养,miR-320 mimic和miR-320 inhibitor分别转染大鼠卵巢颗粒细胞后可明显升高和抑制miR-320 mRNA的表达水平,miR-320过表达可明显降低卵巢颗粒细胞及PCOS大鼠卵巢组织中PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27)表达水平,使血清FINS及HOMA-IR的表达水平升高。即miR-320过表达可起到抑制PI3K/Akt信号通路的作用,最终导致PCOS大鼠IR加重。