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目的观察枳实含药血清对衣霉素(Tunicamycin,TM)诱导的大鼠Cajal间质细胞(inerstitial cells of Cajal,ICC)内质网应激-细胞凋亡的影响并探讨其机制。以进一步揭示枳实促胃肠动力的作用机制。方法取大鼠胃窦组织分离出肌层组织,经酶消化法提取肌间ICC细胞,原代培养的胃ICC细胞经荧光鉴定后,选取对数生长期内的ICC细胞与含药血清及相关药物共培养。(1)使用不同浓度TM(0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)及作用不同时长(12h、24 h、48 h、72 h)于原代培养的ICC细胞,设空白对照组,然后通过CCK-8法检测不同浓度TM对ICC细胞活性的影响;Hoechst 33342染色及Annexin V-FITC/PI双染流式法检测各组ICC的细胞凋亡;透射电镜观察TM干预后细胞超微结构的变化;RT-PCR检测TM诱导后ICC细胞Bax、Bcl-2、CHOP、PERK mRNA表达。(2)制备枳实含药血清,高效液相法鉴定其有效成分及含量;根据实验(1)获得的TM最适作用浓度及最适作用时间,再设置空白对照组、模型组、Salubrinal组(内质网应激抑制剂组)、5%、10%、20%枳实含药血清组;使用CCK-8法检测各组对ICC细胞活性的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式法检测各组ICC的细胞凋亡;透射电镜观察TM干预后细胞超微结构的变化;RT-PCR检测TM诱导后ICC细胞Bax、Bcl-2、CHOP、PERK mRNA 表达。结果(1)与对照组比较,TM显著降低了 ICC的细胞活性(均P<0.05)。TM干预后,ICC细胞出现了细胞凋亡现象,可见细胞核凝集、固缩,凋亡细胞核呈致密明亮的蓝色荧光;且随作用时间延长细胞凋亡率逐渐增加,干预72 h后ICC细胞的凋亡率已达到54.5%;透射电镜下TM干预后ICC细胞体积变小,染色质凝聚、边集,脂滴及内质网空泡化增多,可见凋亡小体形成。Bax mRNA的表达随TM浓度和干预时间的增加而上调;Bcl-2 mRNA的表达在10μg/mL、25μg/mL时先显著下调,50Μg/mL时升至正常水平,当浓度为100μg/mL时表达显著上调,在干预24 h后显著下调,48 h后升至正常水平,72 h后则显著上调,且与各组均有显著差异(均P<0.05);CHOP mRNA的表达随TM浓度增加而上调,随干预时间的延长先逐渐上调,在48h时升至最高,而干预72 h时后表达则显著下调(均P<0.05);PERK mRNA的表达随着TM干预浓度的增加而上调,随着干预时间24 h后显著上调,而48 h、72 h后则逐渐下调(均P<0.05)。(2)枳实水煎液中检测到辛弗林、柚皮苷、橙皮苷,而含药血清中只检测到辛弗林。与对照组比较,模型组ICC的细胞活性显著降低(均P<0.05),透射电镜下ICC细胞染色质凝聚、边集,可见凋亡小体形成,且Bax、CHOP mRNA表达显著上调(均P<0.05),而Bcl-2、PERK mRNA表达差异无统计学意义(均P>0.05)。药物干预后ICC的细胞活性显著提高(均P<0.05),胞内细胞器受损减轻,未见明显凋亡小体,凋亡细胞减少,且Bax、CHOP mRNA表达显著下调,而Bcl-2、PERK mRNA表达显著上调(均P<0.05)。结论TM可以诱导ICC细胞发生细胞凋亡,凋亡的发生可能与内质网应激有关;而枳实对TM诱导ICC内质网应激-细胞凋亡具有抑制作用,增强了细胞的活性,其机制可能与枳实刺激了 PERK/CHOP通路,并通过抑制促凋亡基因Bax的表达、升高抑凋亡基因Bcl-2的表达,来抑制细胞过度内质网应激进而减轻细胞凋亡有关,这可能是枳实促胃动力的作用机制之一。