葡萄是世界上跨越南北的最重要经济型水果作物之一,欧洲葡萄品种因其品质优良产量高作为主栽品种,创造了明显的经济效益。但是欧洲葡萄对病害的抵抗能力差,葡萄白粉病是一种严重危害葡萄生产的典型性真菌病害,造成葡萄减产降质。本文在前人研究的基础上,从中国野生葡萄转录因子家族中选取响应白粉菌诱导表达程度高的Vq MYB153、Vq ERF110、Vq WRKY53、Vq WRKY6、Vq MYB14和Vq MYB15,以及与芪合酶基因有关的转录因子Vqb ZIP1进行酵母双杂交研究发现Vq WRKY6和Vqb ZIP1具有相互作用关系。并进一步研究Vq WRKY6及其互作蛋白增强抗病性的作用。取得的研究结果如下:1.基于课题组前期研究结果,筛选出抗病性转录因子基因与克隆了该基因:从六个转录因子基因Vq MYB153、Vq ERF110、Vq WRKY53、Vq WRKY6、Vq MYB14和Vq MYB15,利用酵母双杂交,筛选出中国野生毛葡萄商-24中的Vq WRKY6与Vqb ZIP1存在互作,利用同源克隆技术,分离获得Vq WRKY6与Vqb ZIP1编码区序列,Vq WRKY6编码342个氨基酸,定位于葡萄2号染色体,Vqb ZIP1编码299个氨基酸。将Vq WRKY6与拟南芥和欧洲葡萄中WRKY家族聚类分析,结果表明Vq WRKY6属于WRKY groupⅢ家族。亚细胞定位结果表明,Vq WRKY6定位在细胞核中。2.通过酵母互作和双分子荧光互补研究,证明Vq WRKY6与Vqb ZIP1在细胞核中互作。以欧亚种葡萄‘赤霞珠’叶片为材料,使用农杆菌介导的瞬时转化法使叶片过量表达Vq WRKY6与Vqb ZIP1基因,在人工接种白粉菌条件下,观察研究中国野生毛葡萄商-24中的Vq WRKY6与Vqb ZIP1互作过程中的抗病性。台盼蓝染色观察叶片上白粉菌丝生长发育进程,结果发现过表达Vq WRKY6和过表达Vq WRKY6+Vqb ZIP1上菌丝发育进程明显迟缓,可能是抑制菌丝的生长发育。DAB染色结果发现接种区域出现红褐色,表明叶片组织产生活性氧增强抗病性。用实时定量PCR分析在过表达叶片中接菌前、后抗病基因的响应状况。结果发现,过表达Vq WRKY6+Vqb ZIP1叶片中PR3、PR4显著响应白粉菌诱导。3.人工接种白粉菌后,中国野生毛葡萄商-24中的Vq WRKY6与Vqb ZIP1互作过程中,使用高效液相色谱测定转录因子基因互作作用下的芪类物质含量,发现芪类物质反式-白藜芦醇,反式-云杉新苷,反式-白皮杉醇在过表达Vq WRKY6+Vqb ZIP1积累量增加的最显著,其他过表达叶片中积累量也有不同程度上升。综上,中国野生毛葡萄商-24中的Vq WRKY6与Vqb ZIP1存在互作作用。在人工接种白粉菌后,将中国野生毛葡萄商-24中基因Vq WRKY6和Vqb ZIP1瞬时转化进赤霞珠葡萄叶片,空载体作为对照组,发现中国野生毛葡萄商-24的转录因子基因Vq WRKY6和Vqb ZIP1互相增强了对白粉病抗性,中国野生毛葡萄商-24的Vq WRKY6和Vqb ZIP1瞬时转化进赤霞珠葡萄叶片,使转化的赤霞珠表现出抗白粉病的功能。因此,研究发现中国野生毛葡萄商-24的Vq WRKY6与Vqb ZIP1互作可增强赤霞珠对白粉病的抗性。所以,中国野生毛葡萄商-24携带的抗病基因是葡萄抗病育种的可利用的基因资源,而且本研究中转录因子基因Vq WRKY6与Vqb ZIP1之间互作形成二聚体,增强了葡萄抗病性,为研究利用中国野生葡萄抗病性转录因子基因提科学依据。