分子光谱法是利用测定物质光谱特征(反射、透射、吸收或发射、散射辐射的波长和强度)而建立的定性定量和结构分析的方法。它是测定和鉴别分子结构的重要研究手段,曾是分子轨道理论发展和实验的基础。分子光谱根据吸收电磁波的范围不同,可分为远红外光谱、红外光谱及紫外、可见光谱等。根据电磁波的发射方式可为分子荧光、磷光和散射光谱等。本文研究和发展了用分子光谱法测定长春地辛、巯嘌呤及核酸的新体系和新方法。重点研究测定对象与金属离子或卤代荧光素染料之间相互作用的吸收光谱、荧光光谱和共振瑞利散射光谱的特征,适宜的反应条件和主要影响因素及其分析应用,并初步探讨了RRS光谱变化的反应机理。本文在重庆市教委科技项目(KJ081306)资助下,研究分子光谱分析技术的某些新的分析应用：1、研究利用吸收、荧光、共振散射光谱技术测定长春地辛的新方法,以及长春地辛与磷钨杂多酸的相互作用,比较方法的灵敏度,并拓展其分析应用领域.2、研究金属离子与巯嘌呤的相互作用以及巯嘌呤的金属螯合物与核酸的反应,并发展了用RRS法测定巯嘌呤和核酸的新方法。1.分子光谱法研究长春地辛与卤代荧光素染料的相互作用及其分析应用1.1长春地辛与赤鲜红的吸收、荧光和共振瑞利散射光谱研究及其分析应用在pH 2.7的BR缓冲溶液中,长春地辛与赤鲜红相互作用形成离子缔合物,导致其吸收光谱的变化,荧光光谱猝灭,以及共振瑞利散射(RRS)光谱显著增强。其吸收峰位于520 nm,荧光峰的最大激发波长和发射波长分别位于523 nm和551nm,最大RRS峰位于325 nm；且吸光度增加、荧光光谱猝灭程度以及散射光谱增强程度均与长春地辛浓度增加呈线性关系,其线性范围分别为：0.8-4.0μg·mL-1、0.2～3.0μg·mL-1、0.08-2.0μg·mL-1、检出限分别为：0.120μg·mL-1、0.072μg·mL-1、0.019μg·mL-1。据此可建立分析测定痕量长春地辛的新方法,将共振瑞利散射法用于尿样中长春地辛含量的快速测定,结果满意。文中对反应机理进行了初步探讨。1.2虎红褪色分光光度法测定长春地辛在pH 4.0的BR缓冲溶液中,长春地辛(VDS)与虎红染料(RB)的相互作用导致吸收光谱的变化,在波长546 nm处产生明显的褪色反应。褪色反应在0.5-6.0μg·ml-1浓度范围内遵循比尔定律,检出限可达0.29μg·mL-1。本文主要研究了褪色反应的吸收光谱特征、适宜的反应条件及影响因素,考察了共存物质的影响,表明方法有较好的选择性。方法可用于尿样中长春地辛的定量测定。2.长春地辛与磷钨杂多酸的共振散射光谱和共振非线性散射光谱研究及其分析应用在0.2mol／L的盐酸介质中,长春地辛(VDS)与磷钨杂多酸(PW)生成离子缔合物,导致其共振瑞利散射(RRS)、以及二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)非线性散射的光谱显著增强。其最大RRS,SOS和FDS波长分别位于308 nm,564nm和390 nm处。在一定范围内其散射光谱增强程度(ΔI)与长春地辛的浓度呈线性关系,方法对于VDS的线性范围和检出限分别为0.08-2.0μg/mL和7.0 ng/mL(RRS法)、0.08-2.5μg／mL和14 ng／mL(SOS法)、0.08-2.5μg/mL和11 ng／mL(FDS法)。其中以测定VDS灵敏度最高的RRS法为例,研究了RRS法的适宜反应条件和影响因素,考察一些共存物质的影响,表明方法有良好的选择性。据此建立了一种灵敏、简便、快速测定VDS的新方法,并用于人血清、尿样中VDS的定量测定。3.钯(Ⅱ)离子与巯嘌呤相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用在pH 4.8左右的BR缓冲溶液中,金属离子Pd2+与巯嘌呤反应形成稳定配合物,其物质的量之比为1：1,同时引起共振瑞利散射(RRS)的显著增强,并出现新的RRS光谱。Pd2+与药物的反应产物具有较宽的散射峰,选取400 nm处为测定波长。在一定范围内散射增强(ΔI)与药物的浓度成正比,线性范围分别是0.05-3.6μg·mL-1。方法具有较高的灵敏度,检出限(3σ)分别为17.0 ng·mL-1。据此建立的分析方法有较好的选择性,可用于血清、尿样中巯嘌呤的测定,能获得较满意的结果。4.铜(Ⅱ)-巯嘌呤与核酸体系的RRS光谱研究在pH 4.6-4.9的B-R缓冲溶液中,巯嘌呤能与铜(Ⅱ)形成螯合物,此时将引起共振瑞利散射(RRS)的显著增强,并出现新的RRS光谱,最大散射波长在453nm附近。加入鲱鱼精DNA(hsDNA)、鲑鱼精DNA(sDNA)、小牛胸腺DNA(ctDNA)后,均导致二元体系的RRS光谱强度的猝灭,且光谱减弱程度与DNA浓度成正比。本文研究了反应产物的吸收和RRS光谱特征,适宜的反应条件及影响因素,据此发展了一种用RRS技术测定DNA的新方法,并成功用于人工合成的样品中的DNA测定。