目的:为了探索食醋的防癌与抑癌作用及其作用机制,本实验采用长期高醋膳食生活条件下的大鼠血清培养人肺腺癌细胞A549,研究长期饲醋条件下动物血清对肺腺癌细胞A549增殖活性、凋亡及Survivin蛋白表达水平的影响。从而证明食醋在抑制肺癌细胞增殖方面的作用及初步探索其作用机制,为肺癌的防治提供理论依据。方法:1.实验方法第一阶段:制备长期饲醋大鼠血清:取SD大鼠50只,雌、雄各半,随机分为含醋饲料组和普通饲料组,每组25只,分笼饲养,动物室温度25±2℃左右,湿度40%-60%。含醋饲料组喂以含醋饲料、含醋饮水,普通饲料组喂以普通饲料、普通饮水。分别饲养8个月后取血,分离血清,-20℃保存,备用。第二阶段:按照以下实验分组检测各组A549细胞增殖活性、调亡及Survivin蛋白的表达水平。实验分组:○1试验组(V组):以含20 %灭活长期饲醋大鼠血清的RPMI1640培养液培养;○2对照组(N组):以含20 %灭活普通饲料喂饲大鼠血清RPMI1640培养液培养;○3顺铂组(D组):以含3 mg/L顺铂的10%胎牛血清的RPMI1640培养液培养;○4空白对照组(NN组):以含10 %胎牛血清的RPMI1640培养液培养。2.实验指标检测1用MTT比色法检测各组吸光度值(OD),OD可间接反映细胞增殖情况。再按照下述公式计算出抑制率,抑制率%=(空白对照组OD-实验组OD)/空白对照组OD,并以各时间点抑制率为纵坐标采用Excel绘制细胞生长曲线图;○2应用流式细胞仪分析细胞凋亡率;○3采用Western-blot法检测A549细胞Survivin蛋白的表达水平。通过以上三种方法来观察长期饲醋条件下大鼠血清对人肺腺癌细胞A549增殖活性、凋亡及Survivin表达水平的影响。3.资料处理所有计量数据用(x±s)表示,采用SPSS15.0统计软件进行统计分析,多组间比较采用方差分析,相关分析采用Spearman法。并用Excel绘制细胞生长曲线图。p <0.05确定为差异有统计学意义。结果:1.长期饲醋条件对人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响对MTT法利用酶标仪测得的各组不同时间点OD值进行统计分析,分析显示各组组间差异有显著性(p <0.05),进一步进行两两比较,差异均有显著性(p <0.05)。结果显示相同时间点V组对A549细胞增殖的抑制作用强于N组,而D组又强于V组。根据OD值,按照抑制率%=(空白对照组OD-实验组OD)/空白对照组OD,计算出各组、各个时间点抑制率,并以各个时间点抑制率为纵坐标采用Excel绘制生长曲线图。对V组不同时间点抑制率的统计分析结果显示差异有统计学意义(p <0.05),表现为在24小时至96小时内随着处理时间延长,抑制率增大,即对增殖的抑制作用呈时间依赖性(r=0.980, p <0.05)。上述结果表明在各个时间点V组和N组之间差异均有显著性(p <0.05),V组对细胞增殖的抑制作用强于N组;V组在不同时间的抑制率差异有统计学意义(p<0.05),随时间延长,V组细胞抑制率增强。2.长期饲醋大鼠血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响各组细胞培养48小时后,分别采用AnnexinⅤ-EGFP/PI双染法和“亚倍体峰法”用流式细胞仪检测细胞早期凋亡和中晚期凋亡,测得的调亡率统计分析显示组间差异有统计学意义(p <0.05)。进一步行两两比较,结果显示V组与N组、D组及NN组比较差异均有显著性(p <0.05),V组凋亡率高于N组和NN组,而低于D组。3.长期饲醋大鼠血清对人肺腺癌A549细胞Survivin蛋白表达的影响对曝光后X-光片扫描,应用凝胶图像分析处理软件处理后,得到各组光密度值,通过对四组净光密度值的统计分析,组间差异有显著性(F=80.666,P<0.05)。进一步两两比较差异均有显著性(P<0.05),V组Survivin蛋白表达量低于N组及NN组,高于D组。结论:1.长期饲醋条件下大鼠血清培养人肺腺癌细胞A549能抑制细胞的增殖,且在一定时间范围内表现为时间依赖的抑制作用。2.长期饲醋条件下大鼠血清能增强人肺腺癌细胞A549的凋亡。细胞凋亡的增强可能是抑制癌细胞增殖的因素之一。3.长期饲醋条件下大鼠血清能减低人肺腺癌A549细胞Survivin蛋白的表达水平。Survivin蛋白表达的下调可能是凋亡增强的一条途径。