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研究目的研究蒙药阿拉嘎-斑布有效成分斑蝥素对胃癌AGS细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为的影响,并通过对斑蝥素作用于胃癌AGS细胞后差异mRNA组的分析,进—步探讨斑蝥素对胃癌AGS细胞作用的可能分子机制,为斑蝥素抗肿瘤作用机制的阐明及临床应用提供实验数据。研究方法 采用热回流法、冷浸法及混合提取法提取阿拉嘎-斑布虫体有效成分斑蝥素,通过高效液相色谱法对其纯度进行分析后,将混合提取法提取的斑蝥素作用于胃癌AGS细胞,通过CCK-S法检测其对胃癌AGS细胞的增殖抑制作用,并测定48h的IC50值。将IC50浓度作用于胃癌AGS细胞48h后,利用划痕愈合实验观察提取物斑蝥素对胃癌AGS细胞迁移能力的影响;Transwell小室法观察提取物斑蝥素对胃癌AGS细胞侵袭能力的影响。通过荧光显微镜观察并结合Annexin V-APC&PI双染法观察提取物斑蝥素对胃癌AGS细胞凋亡的影响;PI-FACE检测提取物斑蝥素对胃癌AGS细胞周期的影响,利用高通量测序技术检测斑蝥素作用前后胃癌AGS细胞转录组的变化水平情况,筛选出差异表达mRNA,进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,分析差异表达mRNA在抗胃癌过程中可能参与的分子功能、信号通路和代谢途径。结果 经比较,混合提取法对斑蝥素的提取效果最好,纯度最高可达到87.8%。CCK-8法检测结果显示,与Blank组比较,蒙药阿拉嘎-斑布有效提取物斑蝥素可抑制胃癌AGS细胞增殖,并呈—定的时间和剂量依赖关系,经计算斑蝥素48h IC50值为6.948μmol/L。6.948μmol/L斑蝥素作用于胃癌AGS细胞48h后,荧光显微镜下可见凋亡细胞,Annexin V-APC&PI双染法及PI-FACS检测显示斑蝥素可诱导胃癌AGS细胞早、晚期凋亡并使G2/M期阻滞,与Blank组相比细胞凋亡率由2.47%增高至5.63%(P<0.05),G2/M期细胞占比由10.01%增高至15.25%(P<0.01)。经高通量测序技术检测,共发现差异表达mRNA9623个,其中4669个表达上调,4954个表达下调,根据mRNA差异表达谱,提高筛选标准,筛选出差异倍数log2(FoldChange)>2,pa.dj<0.05的mRNA 3180个,其中1517个上调,1663个下调,通过文献查阅并结合富集分析结果挑选出19个可能是斑蝥素作用于胃癌AGS细胞关键应答基因的mRNA,其中8个上调和11个下调。结论混合提取法是从阿拉嘎-斑布虫体提取斑蝥素的有效方法。斑蝥素在6.948 μmoL/L时可抑制胃癌细胞AGS的增殖,迁移及侵袭能力。这可能与斑蝥素诱导胃癌细胞周期停滞和细胞凋亡有关。斑蝥素作用后引起胃癌细胞mRNA表达模式的改变,这些差异基因可通过多种生物途径影响胃癌增殖、侵袭等过程。经筛选并结合文献,发现斑蝥素可能是通过上调MAP2K、CDKN1A、RASI)1、DDIT4和下调ZNF121、STAT1、CDK1发挥对胃癌增殖、迁移、侵袭等生物学行为抑制作用及对细胞周期调控作用。