目的:软脑膜转移瘤（Leptomeningeal Metastasis,LM）是一种典型的中枢神经系统转移肿瘤,主要是由其他脏器的实体瘤或恶性脑肿瘤的播散引起的,原发病灶常为肺癌,其中腺癌是常见的组织学类型。虽然已经有一些药物应用于临床,包括使用分子靶向药物,但到目前为止,患者的预后仍很差。水飞蓟宾属于黄酮类化合物,是水飞蓟种子提取物中的重要活性成分。一直以来在临床上作为保护肝脏的药物使用,后来国内外研究发现水飞蓟宾抑制恶性肿瘤具有良好的效果,是一种天然的抗癌药物,且毒副作用低。因此,本研究采用水飞蓟宾作为一种治疗LM的药物,主要观察水飞蓟宾对肺癌软脑膜转移倾向细胞是否具有疗效。本实验通过细胞水平观察水飞蓟宾对LeptoM-LLC细胞活力、增殖、克隆、迁移、侵袭以及凋亡的作用,评价其抗肿瘤疗效,并为后续小鼠模型的药物研究提供一定实验依据。方法:1.细胞肺癌细胞系（Lewis lung carcinoma cell,LLC）是小鼠来源的肺腺癌细胞,根据国外学者的方法,使用LLC细胞建立具有软脑膜转移瘤倾向的肺腺癌细胞系（Leptomeningeal Metastasis-LLC,LeptoM-LLC）,由美国Memorial Sloan Kettering Cancer Center实验室赠予。2.CCK-8法检测细胞活性将LeptoM-LLC细胞接种于96孔板,待细胞长至一定密度后,设置空白组、对照组和实验组,每组设6个复孔,给予不同浓度水飞蓟宾、不同时间段的处理。加入CCK-8试剂,用酶标仪测定在450nm处的吸光度,显示细胞活性,并选择合适的浓度进行后续实验。3.克隆实验将LeptoM-LLC接种于6孔板,设置对照组和实验组,给予不同浓度水飞蓟宾干预。当每个克隆达到50个细胞以上时,加入多聚甲醛固定细胞,进行GIEMSA染色,观察每组细胞的克隆数。4.迁移和侵袭实验使用Transwell小室放入培养板,将LeptoM-LLC细胞接种在上室内,下室内盛装下层培养液。与迁移实验不同,侵袭实验需要在Transwell小室的聚碳酸酯膜上铺一层人工重构基底膜材料,再将细胞接种于Transwell上室。设置对照组和实验组,每组3个复孔,给予不同浓度水飞蓟宾干预。观察在水飞蓟宾的作用下,肿瘤细胞穿过聚碳酸酯膜或聚碳酸酯膜+人工重构基底膜材料的能力,分别体现出细胞的迁移能力和侵袭能力。5.TUNEL法检测细胞凋亡将LeptoM-LLC细胞接种于14mm的细胞玻片上,玻片置于24孔板内。待细胞贴壁后,设置对照组和实验组,每组3个复孔,分别给予不同浓度水飞蓟宾干预。应用TUNEL试剂盒,进行细胞贴片荧光染色,在荧光显微镜下观察不同组的凋亡细胞含量,体现出该药对细胞凋亡的影响。结果:1.水飞蓟宾干预LeptoM-LLC细胞24h、48h、72h后,细胞活力逐步降低,且细胞活力随水飞蓟宾浓度的升高而逐步降低,多组比较差异有统计学意义（P<0.001）。水飞蓟宾浓度为20μg/ml时,随时间延长反而细胞活力增强,差异无统计学意义（P=0.242;P=0.052）。2.实验组40ug/ml、80ug/ml的水飞蓟宾降低了LeptoM-LLC细胞的集落形成能力。随着水飞蓟宾药物浓度的增加,LeptoM-LLC细胞的集落形成能力降低。多组比较具有统计学意义（P<0.05）。3.与对照组相比,实验组水飞蓟宾（40μg/ml、80μg/ml）穿过微孔膜的细胞减少,并随水飞蓟宾药物浓度的增加,穿过微孔膜的LeptoM-LLC细胞逐渐减少。水飞蓟宾可显著降低LeptoM-LLC细胞的迁移能力。多组比较具有统计学意义（P<0.05）。在侵袭实验中、微孔膜的细胞相对较多,实验组水飞蓟宾（40μg/ml、80μg/ml）LeptoM-LLC细胞穿过基质胶、微孔膜的细胞比对照组细胞减少,并随水飞蓟宾药物浓度的增加,穿过基质胶、微孔膜的LeptoM-LLC细胞逐渐减少。水飞蓟宾可显著降低LeptoM-LLC细胞的侵袭能力。多组比较具有统计学意义（P<0.05）。4.TUNEL染色显微镜下显示出现细胞凋亡呈红色荧光。对照组LeptoM-LLC细胞没有出现红色荧光,而实验组水飞蓟宾（40μg/ml）干预的LeptoM-LLC细胞有较多明显的红色荧光。因此,水飞蓟宾可促进LeptoM-LLC细胞的凋亡。结论:1.水飞蓟宾抑制LeptoM-LLC细胞的增殖,且呈时间依赖性和浓度依赖性。2.水飞蓟宾抑制LeptoM-LLC细胞的迁移和侵袭,呈浓度依赖性。3.水飞蓟宾干预LeptoM-LLC细胞,诱导细胞出现凋亡。