禾谷孢囊线虫（Heterodera avenae）是一类重要的植物寄生线虫,主要危害禾本科作物,全世界小麦主产区均有分布,并造成严重经济损失。目前对禾谷孢囊线虫的防治仍以化学防治为主,但化学防治存在污染环境和危害人畜健康等弊端。因此,开发高效安全和对环境友好的微生物型杀线剂已成为国内外的研究热点。本研究以长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）T6菌株和禾谷孢囊线虫作为试验材料,筛选了长枝木霉T6菌株高效杀线活性培养基和优化了其杀线活性培养条件;测定了发酵液杀线稳定性;分析了木霉蛋白种类;分离了关键杀线蛋白。研究结果旨在揭示长枝木霉T6菌株对禾谷孢囊线虫的毒杀作用机制,以及为禾谷孢囊线虫的生物防治提供理论依据。取得的主要研究结果如下:1.筛选获得长枝木霉T6菌株最佳杀线活性培养基为酪蛋白培养基,并通过单因素试验得到最适培养条件为pH=7,温度28℃,培养时间7 d,接种量为1-2 mL,摇瓶装液量为50-70 mL,其中发现温度、pH和培养时间作为影响长枝木霉T6菌株发酵液杀线活性最为显著的3因素。同时,利用响应面优化最终获得长枝木霉T6菌株最佳杀线活性发酵条件为pH=6.64,温度26.52℃,时间6.8 d,且在该预测条件下其发酵液杀线活性高达86.10%,与预测值相吻合。2.不同酸碱度、温度、金属离子、氧化还原和储藏时间对长枝木霉T6菌株发酵液杀线稳定性具有不同程度的影响。当pH 4-10时,长枝木霉T6菌株发酵液对禾谷孢囊线虫2龄幼虫均具有较高的致死作用,处理72 h后其死亡率均大于80%,与对照相比差异性不显著;在温度为30-60℃条件下,其发酵液杀线活性和对照相比无显著差异,而当温度大于70℃时,其杀线活性开始降低;Zn2?和K?对发酵液杀线活性具有明显的增强作用,而Cu2?对发酵液杀线活性具有抑制作用,以及Mg2?、Fe3?、Mn2?和Na?对发酵液杀线活性无显著影响;当氧化剂和还原剂浓度分别低于0.08和0.06mol·L-1时,其对杀线活性无显著影响;发酵液在室温下保存0-60 d后,其杀线活性无显著变化。3.质谱检测长枝木霉T6菌株分泌的蛋白种类,共获得谱图39537张,且经与木霉蛋白库进行匹配后获得4种蛋白,利用氨基酸序列对蛋白理化性质及结构进行预测。对匹配蛋白进行GO功能注释,发现其参与3种分子功能,分别为转化活性、催化活性以及酶结合活性;参与细胞组分形成过程中发现其分别在细胞,细胞膜和细胞器等9种细胞位置上均具有匹配蛋白的存在;生物学过程分析发现其主要参与细胞组成、蛋白质定位、代谢和应激等过程。COG功能注释表明,其主要功能为蛋白的翻译和修饰、蛋白质转运以及蛋白质分子伴侣、能量产生和转化以及氨基酸的转运和代谢。4.采用透明圈法和分光光度法定性和定量分析了长枝木霉T6菌株产生胞外蛋白能力,表明长枝木霉T6菌株能够产生大量的胞外蛋白。采用中性盐析法和柱层析法分离了长枝木霉T6菌株发酵液杀线活性蛋白,结果表明层析共获得3组洗脱峰,其中洗脱峰A和B具有较强的杀线活性,当其浓度分别为12.48μg·mL-1和9.20μg·mL-1时,处理线虫72h后其死亡率分别为52.05%和43.89%,而洗脱峰C的杀线活性较低,线虫死亡率仅为22.42%。