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山羊精液保存技术可提高优秀种公羊的利用效率,加快品种改良步伐,便于精液长途运输,降低疾病传播风险。但目前山羊精液低温保存和冷冻保存技术都还不成熟,需要进一步研究完善。本研究以安徽白山羊为对象,系统研究了不同因素对山羊精液低温及冷冻保存效果,内容如下:1、pH对山羊精液低温保存的影响。采集的混精均分成5份,分别用pH为6.15、6.25、6.35、6.45以及6.80的稀释液稀释,5℃冰箱保存,每两天检测精液品质。结果:保存2d后,pH6.35组的精子活力显著高于其他组(P<0.05);在保存的第2、6、8、10、12d,pH6.35组的质膜完整率及顶体完整率显著高于其他组(P<0.05);用pH6.35的稀释液进行低温保存精液,在保存4、10、12d时检测前提升缓冲液pH至7.2,活力均显著高于未提升组(P<0.05)。2、缓冲液渗透压对山羊精液低温保存的影响。采集的混精均分成4份,分别使用渗透压为330m Osm、350mOsm、375mOsm、400mOsm的稀释液进行稀释,5℃冰箱保存,每两天检测精液质量。结果:保存8d后,渗透压为375mOsm组的活力显著高于其他各组(P<0.05)、保存6天后375mOsm组的质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组(P<0.05)。3、使用上述优化了的低温保存方法低温保存后进行人工授精,用鲜精、保存3d、6d、9d的精液输精,结果低温保存3d、6d的不返情率大于70%,达到了输精的要求,低温保存9d的不返情率虽然显著低于第3d(P<0.05),但也达到63.11%。4、通过一系列试验,优化了山羊冻精保存方案:公羊年龄4~6岁;基础稀释液组分为Tris 3.07g/100mL、果糖1.26g/100mL、柠檬酸1.64g/100mL、卵黄浓度为15%;两步稀释,稀释后精子密度为2.4×108个/mL;降温平衡时间4h;甘油浓度为5%,添加甘油后再平衡时间为30min;距离液氮面上方预冷高度4cm,预冷10min;37℃水浴解冻30s。5、胆固醇(cholestero,CHL)替代卵黄(egg york,EY)对山羊冻精质量的影响。采集精液混合后均分成5等份,分别用添加1.0 g/L(C1组)、2.5 g/L(C2.5组)、5.0 g/L(C5组)、10.0g/L(C10组)的CHL或15%的EY(对照组)的基础冷冻缓冲液稀释冷冻。解冻后的精子运动学参数使用精子分析仪(SCAS)检测,质膜完整率通过低渗肿胀试验(hypoosmotic swelling test,HOST)检测,顶体完整率通过姬姆萨染色来检测。结果显示:对照组的冻-融精子活力、顶体完整率、曲线速率(curvvilinear velocity,VCL)、平均路径速度(velocity of average path,VAP)显著高于各CHL添加组(P<0.05),质膜完整率、线性度(linearity,LIN)、前向性(straightness,STR)、摆动性(wobble,WOB)、精完整率显著高于C1组(P<0.05)。6、磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)替代EY对山羊冻精质量的影响。采集精液混合后均分成5等份,分别用添加10 g/L(P10)、15 g/L(P15)、20g/L(P20)、25g/L(P25)的PC或15%EY(对照组)的基础冷冻缓冲液稀释冷冻。结果:P15组冻-融精子的活力及VCL、VAP、LIN、STR、WOB及BCF等运动参数与EY组差异不显著(P>0.05);P10、P20及P25组解冻精子活力均显著低于EY组(P<0.05)。7、精子冻-融子头部侧摆幅度(amplitude of lateral head displacement,ALH)及鞭打频率(beat-cross frequency,BCF)与C2.5、C5和C10组无显著差异(P>0.05),但质膜前后膜上胆固醇和磷脂含量变化。检测发现山羊鲜精中精子膜磷脂含量为559.5±20.23 nmol/109,胆固醇含量为320.0±16.7 nmol/109;采用基础稀释液(不添加卵黄或脂质)稀释精液,冻-融后,精子磷脂含量为420.3±18.1 nmol/109,胆固醇含量为130.7±20.8 nmol/109;冻-融后精子磷脂、胆固醇丢失质量比约为3.759﹕1。8、PC-CHL联合替代EY对山羊冻精质量的影响。根据前一个试验研究的结果设计了以下PC-CHL联合替代配方:基础液+19g/LPC+1g/L CHL(P19+C1);基础液+18g/L PC+2g/L CHL(P18+C2);基础液+16g/L PC+4g/L CHL(P16+C4);基础液+14g/LPC+6g/L CHL(P14+C6),对照组为基础液+15%EY。结果:冻-融处理后,P19+C1、P18+C2组的精子活力、VCL、直线运动速度(velocity of straight-line,VSL)、VAP均与对照组无显著差异(P>0.05);P16+C4组的精子活力、VCL、VAP均显著高于对照组(P<0.05);P14+C6组的精子活力显著低于对照组(P<0.05);P16+C4组精子冻-融后磷脂含量显著高于其他各组(P<0.05),胆固醇含量低于EY组,但差异不显著(P>0.05)。9、将上一试验中P16+C4组和EY组的颗粒冻精用于山羊人工授精,P16+C4组的不返情率、受胎率、产羔率均高于EY组(P>0.05),但公、母比例低于EY组(P>0.05)。结论:1.用于山羊精液5℃低温保存时,缓冲液最佳酸碱度为pH6.35,最佳渗透压为375mOsm;配种前提高精液pH至7.2,可提高精子活力。2.同时添加14g/L的PC和6g/L的CHL可替代15%卵黄用于山羊的精液冻存。