毛皮动物源产ESBLs奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药与毒力基因分析

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lpwxlwan
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奇异变形杆菌是重要的人畜共患病原菌,该菌在人医临床已被广泛认为是仅次于肠道致病性大肠杆菌的人畜共患菌,且该菌引发疾病的发病率和死亡率呈逐年递增趋势,引起了国内外有关专家学者的广泛关注(Hamilton AL,et al.,2018)。临床上通常使用抗生素对该菌引发的疾病进行治疗,但由于抗生素的长期不合理使用,已促使奇异变形杆菌高度耐药株的产生,不仅给该菌引发疾病的治疗增加了困难,同时其耐药基因和可移动原件在细菌之间的水平传播,给人和动物的公共卫生安全造成了严重的威胁。本研究旨在了解山东地区毛皮动物养殖场中产ESBLs奇异变形杆菌的流行情况以及耐药特点。于2019年10月至2020年11月,从山东省聊城、菏泽、海阳、威海等市的貉、狐狸、水貂养殖场采集动物的粪便、饲料、饮水、土壤、肛拭子和咽拭子样品224份、胴体61份,共计285份样品,进行产ESBLs奇异变形杆菌分离培养。经微生物质谱与16S r RNA基因序列分析鉴定奇异变形杆菌,对分离菌株进行同源性分析,了解分离到的奇异变形杆菌之间的亲缘关系;利用纸片法进行产ESBLs奇异变形杆菌确证试验,并检测15种常用药物的耐药性,初步了解毛皮动物源奇异变形杆菌的耐药情况;利用PCR技术检测26种耐药基因以及Ⅰ类整合子,了解其耐药基因盒的存在情况;利用PCR技术检测8种常见的毒力基因,了解奇异变形杆菌毒力基因特点。本研究共分离了53株奇异变形杆菌,貉、狐狸和水貂源样品中奇异变形杆菌的分离率分别为52.94%(18/34)、51.16%(22/43)和6.25%(13/208),其中粪便样品检出率最高(41.25%),其次是土(33.33%);产ESBLS奇异变形杆菌确证试验的检测结果显示,分离的53株奇异变形杆菌中,其中产ESBLs菌株23株,分离自貉源15株、狐狸源8株。耐药表型检测结果显示,分离的23株产ESBLs菌株对氨苄西林、亚胺培南、复方新诺明等11种抗生素耐药率均超过80%,分离的30株非产ESBLs菌株仅对3种抗生素耐药率超过80%,表明产ESBLs菌株耐药现象严重。六大类耐药基因(β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类、磺胺类和氯霉素类)检测结果显示,53株分离菌分别检出了1~11种耐药基因,其中β-内酰胺类(bla TEM)、磺胺类(sul1)检出率为100%,未检测到β-内酰胺类(bla SHV、bla PSE)、喹诺酮类(qnr S、oqx A)、氨基糖苷类(aa C1、aa C3)、多粘菌素类(van A、van B、van C1)、大环内酯类(mef A、mrs D)、四环素类(tet B);53株奇异变形杆菌中有12株携带Ⅰ类整合子,携带率为22.64%(12/53)。耐药基因盒有5种类型:aad A2-intl1(4/53)、aad A2-aad A1-sul3-dfr A12-intl1(3/53)、aad A2-aad A1-sul1-intl1、aad A2-sul1-intl1和aad A1均为(1/53),2株没有基因盒结构。毒力基因检测结果表明,在检测的8种毒力因子中有5种毒力因子(ure C、zap A、pmf A、atf A、atf C)的检出率均为100%,另外3种毒力基因mrp A、uca A和rsb A检出率偏低,分别为24.53%、43.4%和69.81%,其中mrp A毒力基因仅在水貂源分离株中检出。本研究通过对山东地区2019年10月至2020年11月不同动物源(貉、狐狸、水貂)的样品进行产ESBLs奇异变形杆菌的分离鉴定、常用药物的耐药情况、Ⅰ类整合子与耐药基因携带情况、毒力基因携带情况的研究发现,山东地区毛皮动物养殖场中存在产ESBLs奇异变形杆菌污染。该地区奇异变形杆菌对多种药物表现耐受,多重耐药率高达100%,产ESBLs菌株对氨苄西林、亚胺培南、复方新诺明等11种抗生素耐药率超过80%,非产ESBLs菌株仅对3种抗生素耐药率超过80%,表明产ESBLs菌株耐药现象严重。本研究以期初步了解奇异变形杆菌的耐药情况,比较不同来源菌株的差异性,为生产上合理用药提供理论依据,为有效防控奇异变形杆菌病奠定基础。
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