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内生真菌长期生活在植物组织内部,与宿主协同进化,在演化过程中二者形成了互惠共生的关系,在宿主的生长发育和系统演化过程中起重要作用。内生真菌可以产生一些重要的具有生物活性的化合物,对内生真菌次生代谢产物的研究,可以筛选得到一些结构新颖、活性专一的物质。本文以无花果一株具有良好抗菌活性的链格孢属(Alternaria)内生真菌FL25为研究对象,通过对其次生代谢产物的研究,寻找具有良好生物活性的物质。
对具有活性的菌株FL25进行液体发酵,提取其代谢产物粗品(49g),经硅胶柱粗分得到9个组分F1-F9。以5株细菌金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、乳链球菌(Streptococcus Lactis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、绿脓杆菌(Pseudomonas.aeruginosa)和大肠杆菌(Escherichia coli)和10株植物病原菌白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、苹果腐烂病菌(Valsa mali)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum fsp.niveum)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp. Cucumerinum)、芍药炭疽病菌(Colletotirchum gloeosporioides)、草莓镰刀霉菌(Fusarium oxysporumf.sp.fragariae)、小麦赤霉病菌(Fusarium Graminearum)以及一株霉菌青霉菌(Penicillium glaucum)为活性追踪的测试菌。结果显示,活性成分主要集中在F1-F6六个组分中。运用硅胶柱层析、sephdexLH-20柱层析、薄层制备层析及重结晶等分离纯化手段,从F1组分中得到化合物1;F2组分得到化合物1、2:F3组分中得到化合物3;F4组分中得到化合物4;F5组分得到化合物5;F6组分得到化合物6。通过理化性质分析和波谱分析(MS,NMR)最终确定了其中5个化合物的结构:Fumitremorgin B(1),Fumitremorgin C(2),Helvolic Acid(3),cerevisterol(4)和环(苯丙-丝)二肽(5)。光谱分析化合物6可能是一个脑苷脂化合物。
接着对分离得到的纯品化合物(1,2,3和5)对以上的5种细菌、10种植物病原菌和1种霉菌进行了最小抑制浓度(MIC)的测定。结果显示,四个化合物对大部分的测试菌均具有很好的抑制效果。与阳性对照比较,化合物3的活性最好,其对细菌的抑菌活性在3.125~12.5μg/ml,真菌的抑菌活性在3.125~12.5μg/ml;化合物1和2的抑菌活性相近;化合物5的活性相对较弱。