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背景热休克蛋白(HSPs)是进化保守的、在多种组织细胞均有表达的一种分子伴侣,在多种刺激后表达增加,以保护机体不受或少受伤害,大量研究显示某些热休克蛋白参与神经元的保护作用。热休克蛋白A12B (Heat Shock Protein A12B, HSPA12B)是一种新发现的特异性表达于血管内皮细胞的基因,目前尚不清楚其在缺血性脑损伤中的作用。前期我们采用HSPA12B转基因鼠复制脑缺血/再灌注损伤模型,观察到高表达HSPA12B对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,本研究旨在探讨其保护机制。目的探讨HSPA12B对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及作用机制内容与方法采用高表达人类HSPA12B基因的转基因鼠,以线栓法堵塞左侧大脑中动脉(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)诱导局部脑缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion, I/R)损伤模型,观察和比较不同表达水平的HSPA12B对脑缺血/再灌注损伤的影响,从而明确HSPA12B对缺血性脑损伤是否有保护作用,并探讨其可能的机制。1. HSPA12B转基因鼠：高表达人类HSPA12B基因的转基因鼠(HSPA12B transgenic mice, HSPA12B Tg)由本课题组、南京大学模式动物研究所、美国东田纳西大学韩志华教授实验室共同构建,饲养于南京大学模式动物研究所的SPF级动物房中。2.局灶性脑缺血/再灌注模型：采用8-10周龄、雄性HSPA12B转基因鼠(HSPA12B Transgenic mice, HSPA12B Tg)以及同窝所生的雄性野生型鼠(Wild Type, WT),以MCAO构建局灶性脑缺血模型。缺血时间1h,再灌注时间为3-24h(因具体实验而定)。3.脑损伤评价：(1)脑梗塞面积：分离脑组织,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色、照相、分析软件(Alpha Ease FC)统计梗塞面积。(2)神经行为学评分：采用Garcia量表,对小鼠的运动、感觉等功能进行评价。4.血脑屏障通透性：以伊文斯蓝(Evans Blue)通过血脑屏障(Blood Brain Barrier, BBB)向脑组织渗透的量表示；免疫印迹法测定参与构成血脑屏障的紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1, ZO-1)、紧密连接蛋白-2(zonula occludens-2、促血管生成素(Angiopoietin-1, Ang-1)的蛋白水平。5.神经元凋亡：(1)分离脑组织并制备成石蜡切片,运用TUNEL法进行神经元凋亡染色。(2)免疫印迹法测定脑促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,凋亡信号通路上ERK、P38、JNKs及其磷酸化表达水平。6.统计学处理：数据以均数±标准差(x±s)表示,用Stata7.0软件进行统计学分析,多组间比较采用ANOVA分析,多组间两两比较post-hoc检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果1.与MCAO的WT鼠比较,MCAO的HSPA12B Tg鼠脑梗塞体积显著缩小、神经行为学功能障碍显著改善；2.与MCAO的WT鼠比较,MCAO的HSPA12B Tg鼠血脑屏障通透性显著降低,且HSPA12B Tg鼠脑组织中ZO-1、ZO-2. Ang-1的表达水平显著升高。3.与MCAO的WT鼠比较,MCAO的HSPA12B Tg鼠的神经元凋亡数目显著减少,而且HSPA12B Tg鼠脑组织中P38和ERKs的磷酸化水平显著降低、Bcl-2/Bax比值显著升高。结论高表达HSPA12B对MCAO引起的局灶性脑缺血/再灌注损伤具有保护作用,该保护作用可能与降低BBB通透性、减轻神经元凋亡有关。