随着生物技术的迅速发展,蛋白多肽类等生物技术药物在现代疾病的预防和治疗中的应用日益广泛。蛋白多肽类药物稳定性差,口服或其它非注射给药途径生物利用度低,目前大部分蛋白多肽类药物采用注射给药;另外,该类药物在血液中的半衰期短,注射后很快被清除或降解,因此需要频繁给药,患者顺应性较差。将蛋白多肽类药物制备成缓释注射剂不仅可以减少给药次数,提高患者依从性和治疗效果,同时还可以降低药物的毒副作用,减少总给药剂量,减轻病人的经济负担。胸腺五肽是一种临床上广泛应用的双向免疫调节剂,适用病症范围广,用药时间为1～24个月不等,给药途径为皮下、静脉和肌肉注射。目前国内外上市销售的剂型有注射用冻干粉针,注射液及预充式注射液,给药频率为1～2天1次。研究开发长效缓释的TP5微球制剂能解决患者顺应性差的问题,促进该药的临床应用和市场开发。目的:寻求一种快速可靠、可调控的体外释放分析方法来评价胸腺五肽微球制剂的释放度;研究能适应中试放大的微球制剂的处方和工艺,为长效注射剂的研究与开发奠定基础。方法与结果:1.建立了TP5微球的含量和释放度的HPLC分析方法,通过对方法的标准曲线、精密度和重复性及回收率考察,证明方法重复性良好,准确度高。2.确立了主要的微球评价指标:形态、粒径、跨距、产率、包封率、载药量、突释和释放曲线。通过模型药物微球的单因素试验考察,结果表明在考察范围内随着PLGA浓度的降低,复乳搅拌转速的增大,乳化时间的增加及油/外水相比例的减小,微球的粒径减小。药物的稳定性试验表明,该药在50℃的磷酸盐缓冲液中放置30h后含量约下降了20%,药物在-20℃磷酸盐缓冲液中冻存28d,药物基本稳定;药物溶液超声12min,药物基本稳定。3.考察了体外加速释放试验中释放介质种类、介质的性质(离子强度、pH、表面活性剂浓度等)和释放条件(水浴摇床的转速、温度)对微球的释放影响。三种介质的释药速度顺序为:乙醇溶液＞醋酸盐缓冲液＞磷酸盐缓冲液;离子强度抑制药物的释放;pH低时释药变快,但过低则微球聚集而释药变慢:Tween80浓度对释放影响不大;水浴摇床的转速对释放影响不大;释放温度与释放速率常数符合阿伦尼乌斯方程。4.建立了小鼠体内皮下微球残留药物含量的测定方法,通过对方法的标准曲线、精密度和重复性及回收率考察,证明方法重复性好,准确度高。在初步的微球体内释放试验基础上,以体内外相关性好坏为指标,根据体内药物释放度试验的结果,选择20%的乙醇溶液作为释放介质,采用分阶段升温的方法,调整释放条件,使体外加速释放与体内释放结果呈良好的相关性。确立了体外加速释放试验的方法,为后期制剂筛选评价奠定基础。5.选用伯明翰的PLGA作为微球骨架材料制备微球。DSC分析说明PLGA材料与药物分子之间可能存在相互作用。PLGA浓度越高包封率越高,但释放度下降。载药量在5～8%的范围内制备微球对微球的各项指标影响不大。通过单因素考察结合预试验确定了PLGA浓度、理论载药量及甘露醇量为处方优化考察的主要因素,采用正交试验对TP5微球的制备处方工艺进行了优化。选择6%理论载药量,200mg/ml PLGA浓度,重复制备三批优化后处方,制备的微球形态圆整,平均粒径15～50μm,分布均匀,载药量约为5%,包封率约为85%,突释小于10%,释放可持续一个月。6.研究了制备工艺中一些关键参数的影响,发现超声制备初乳时间,初乳推注复乳化的速度,固化温度,微球中的含水量影响药物的释放。超声时间延长,药物释放减慢;初乳推注速度减慢后,微球的粒径、包封率等影响不大,药物释放增加;固化温度升高后微球的收率略有下降,药物释放增快;微球中的水分降低,药物的释放减慢。7.对微球的放大制备工艺进行了初步研究。逐次对优化后的处方工艺进行了放大试验,放大2、6倍所制备微球的各项指标与放大前基本一致,放大18倍时粒径增大,后期释放较放大前偏快;放大18倍时制备一批微球的产量能达到近2g,基本可满足初步的中试放大要求。8.对微球的体外长期释放机制进行了研究。对释药曲线的数学模型拟合,各模型的线性相关系数依次为:Ritger-Peppas＞一级释放模型＞零级释放模型＞Higuchi释放模型。释放符合Ritger-Peppas指数方程,在该方程中,n=06981,介于0.43与0.85之间,说明药物从微球中的释放是扩散和溶蚀相结合。综合微球的形态观察,溶胀率和失重率测定结果,推测微球在释药初期是以扩散为主,到后期微球溶胀加剧后,释药以扩散与溶蚀相结合。9.微球的稳定性考察结果表明,微球在高温和光照条件下不稳定,微球制剂应低温、避光保存。微球在加速试验及长期试验条件下放置1个月稳定。微球经100万rad的γ射线照射后,外观、含量及释放行为都发生了变化,甘露醇可以部分对抗这种影响。结论:建立了一种快速可靠可调控的体外释放分析方法来评价胸腺五肽微球制剂的释放度,其对体内释放预测效果良好。放大后制备的微球粒径呈正态分布,平均粒径为15～50μm,包封率在85%以上,突释在10%以下,室温贮存一个月质量稳定。胸腺五肽微球体内1个月累积释放度大于90%,释药速率比较平稳。