【摘 要】
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目的:本研究旨在通过16S r RNA高通量测序技术检测广西冠心病患者和健康人群肠道菌群结构及多样性,同时探索不同中医证型的冠心病患者肠道微生物群落的差异性,从而在肠道微生物的层面观察冠心病发生发展过程中可能具有重要作用的菌群变化。方法:收集2020年4月至2020年12月符合冠心病痰瘀互结证、气虚血瘀证、痰阻心脉证、心脾两虚证患者,选取同一时期经体检及实验室检查排除其他疾病的受试者为健康对照组,
【基金项目】
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2019年广西中医药大学博士科研启动基金项目:基于宏基因组学从“痰瘀”探讨广西冠心病人群肠道菌群结构及相关性研究;项目编号:2019BS030;
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目的:本研究旨在通过16S r RNA高通量测序技术检测广西冠心病患者和健康人群肠道菌群结构及多样性,同时探索不同中医证型的冠心病患者肠道微生物群落的差异性,从而在肠道微生物的层面观察冠心病发生发展过程中可能具有重要作用的菌群变化。方法:收集2020年4月至2020年12月符合冠心病痰瘀互结证、气虚血瘀证、痰阻心脉证、心脾两虚证患者,选取同一时期经体检及实验室检查排除其他疾病的受试者为健康对照组,每组10例。收集受试者临床资料,检测血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、空腹血糖(GLU);通过高通量测序技术,比较各组粪便样本的肠道菌群丰度、结构及物种多样性的差异。结果:1、基线资料:各组年龄、性别、BMI、血脂、空腹血糖均无统计学差异,提示研究具有可比性。2、肠道菌群结果:(1)本研究样品测序共获得3993386对Reads,双端Reads拼接、过滤后共产生3915266条Clean tags,每个样品至少产生77376条Clean tags,样本平均序列数为78305条。(2)菌群Alpha多样性分析:Chao1指数(P=0.01<0.05)、Ace指数(P=0.00<0.05),有统计学意义,提示五组菌群丰度存在显著差异。Shannons指数(P=0.37>0.05)、Simpson指数(P=0.19>0.05),提示五组间的群落多样性无统计学差异。(3)Beta多样性分析:各组样本具有一定的聚类位置,表明同组样本具有一定的相似性;心脾两虚证组与健康对照组离散性最大,表明两组样本在肠道菌群的构成上差异较明显。(4)物种累积曲线、稀释曲线、等级丰度曲线提示本实验所收集样本量的充分性、测序深度及其菌群物种丰富度均较高。(5)不同分类学水平结果:1)在门水平,健康对照组与冠心病组比较:拟杆菌门、梭杆菌门丰度较冠心病组高,差异比较有统计学意义(P<0.05);厚壁菌门心脾两虚证组高于健康对照组,且差异比较有统计学意义(P<0.05)。不同中医证型冠心病组厚壁菌门比较:心脾两虚证组>痰阻心脉证组>气虚血瘀证组>痰瘀互结证组,心脾两虚证组与痰瘀互结证组比较,具有统计学意义(P<0.05);2)在纲、目水平,五组样本的优势菌种在丰度虽有高低程度不同但无统计学意义(P>0.05)。3)在科水平,普雷沃氏菌科、瘤胃菌科丰度比较:健康对照组与心脾两虚证型组比较存在差异(P<0.05);双歧杆菌科:健康对照组>痰阻心脉证组>痰瘀互结证组>气虚血瘀证组>心脾两虚证组,各组之间均存在统计学差异(P<0.05)。4)在属水平,通过组间群落物种显著性差异分析,各组间存在差异性菌种的相对丰度比较,罗氏菌属:健康对照组>痰阻心脉证组>痰瘀互结证组>气虚血瘀证组>心脾两虚证;拟杆菌属和双歧杆菌属:健康对照组>痰瘀互结证组>气虚血瘀证组>痰阻心脉证组>心脾两虚证组。瘤胃球菌属:心脾两虚证组>气虚血瘀证组>痰阻心脉证>痰瘀互结证组>健康对照证组。大肠杆菌志贺氏菌属:心脾两虚证组>痰瘀互结证组>气虚血瘀证组>痰阻心脉证组>健康对照组。结论:(1)冠心病患者与健康人群肠道菌群比较,其差异体现在门、科、属水平的菌群丰度。(2)不同中医证型冠心病患者肠道菌群比较,心脾两虚证患者优势菌群的数量减少较其余三个证型更为显著。(3)普雷沃氏菌科、瘤胃球菌属、大肠杆菌志贺氏菌属可能是冠心病心脾两虚证患者肠道微生物的标记物。
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