论文部分内容阅读
目的:脑卒中是导致人类死亡的第二大原因,发病率高、死亡率高、致残率高且预后效果差。脑卒中的发病机制复杂,临床上尚缺少有效的治疗药物。传统的中药验方复元醒脑汤对脑缺血有良好的治疗效果。我们通过构建SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型(Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)和PC12细胞糖氧剥夺模型(oxygen and glucose deprivation,OGD),对复元醒脑汤及制天南星主要活性成分盐酸水苏碱和秋水仙碱的脑保护作用进行研究,并对盐酸水苏碱和秋水仙碱的作用机制进行了研究。方法:1.采用线栓法构建SD大鼠脑缺血2h后再灌注损伤24h模型。动物随机分为假手术组、模型组、复元醒脑汤低剂量组(5.5g/kg)、中剂量组(11g/kg)和高剂量组(22g/kg)。脑缺血15min后灌胃给药一次。盐酸水苏碱(30mg/kg)和秋水仙碱(0.5mg/kg)给药组,缺血15min后尾静脉给药一次。再灌注24h后对动物进行行为评分,取全血离心后取血清,检测血清中SOD和MDA的含量变化,ELISA检测血清中TNF-α和IL-1β的变化;取脑组织进行相关染色观察脑组织损伤情况以及病理形态的变化和神经细胞凋亡情况等。2.构建PC12细胞缺糖缺氧模型,用细胞培养箱和缺氧装置构建细胞模型。实验分为正常对照组、OGD组、盐酸水苏碱和秋水仙碱给药组,缺氧前2h给予药物治疗,给药组和OGD组放入缺氧装置中缺氧6h,正常对照组不做处理。缺氧结束之后,MTT检测实验各组细胞存活情况,利用流式细胞检测技术检测凋亡和细胞内ROS含量的变化情况,利用western blot方法分析了NF-κB、MAPK和JAK2-STAT3通路相关蛋白的表达情况。结果:1.与缺血再灌注模型组相比复元醒脑汤低、中、高(5.5、11、22g/kg)剂量给药组、盐酸水苏碱以及秋水仙碱给药组大鼠神经功能评分明显降低(P<0.05);TTC染色结果显示复元醒脑汤给药组脑梗死百分比与模型组相比显著下降(P<0.05);HE染色结果显示模型组大鼠脑组织细胞损伤严重,细胞间隙变大,细胞核皱缩,给药各组大鼠脑组织细胞损伤减轻;TUNEL染色结果显示假手术组大鼠脑组织细胞形态正常没有棕色的凋亡细胞,与模型组相比给药各组凋亡细胞数目减少且具有统计学意义(P<0.05);NISSL染色结果显示给药各组完整神经细胞数目较模型组增多(P<0.05)。比较实验各组血清中SOD和MDA的含量变化,给药各组SOD的含量较模型组上升(P<0.01);MDA含量较模型组有所下降(P<0.05);ELISA检测血清中TNF-α和IL-1β的变化,实验各组较模型组均下降(P<0.05)。2.MTT法检测细胞生存率,与OGD组细胞相比,盐酸水苏碱和秋水仙碱给药组细胞的生存率上升(P<0.05);盐酸水苏碱和秋水仙碱可以减少OGD刺激引起的细胞凋亡,并且可以降低细胞内ROS的表达(P<0.05);在m RNA水平上盐酸水苏碱和秋水仙碱可以降低TNF-α和IL-1β的表达(P<0.05),在相关异常蛋白表达上给药组与OGD组相比得到改善(P<0.05)。结论:1.复元醒脑汤能够改善SD大鼠缺血再灌注损伤引起的行为障碍以及减少脑组织梗死面积百分比,减轻脑神经细胞的损伤情况具有脑保护作用;盐酸水苏碱和秋水仙碱对脑缺血再灌注损伤也具有保护作用。2.盐酸水苏碱和秋水仙碱能够提高OGD刺激后PC12细胞的生存率,减少细胞的凋亡,降低细胞内ROS的含量,降低炎症因子的含量,减少OGD刺激引起的细胞损伤。3.盐酸水苏碱和秋水仙碱可能通过降低OGD刺激后PC12细胞p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、p-p38、p-JNK蛋白的表达从而发挥保护作用。