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近年来研究认为,感染或外伤后机体发生SIRS和MODS足由于过度释放的炎症介质产生失控的炎症发应所导致的,而白细胞在其中起着至关重要的作用。中性粒细胞在黏附分子的介导下与内皮细胞紧密黏附,并被各种促炎因子激活。激活的中性粒细胞和单核细胞在趋化因子作用下,经毛细血管间隙迁出血管,向组织移行。浸润的中性粒细胞能释放30余种介质,通过两种主要途径,造成组织损伤。由于成熟白细胞大部分储存在骨髓、肝、脾、淋巴等贮血器官中,循环血液中只占很小的一部分,炎症反应过程中激活了的白细胞必须先从贮血器官进入循环血液才能进入组织中发挥作用。本实验拟提出“白细胞过滤”假说:在全身炎症反应过程中通过将循环血液中白细胞过滤一部分,可有效降低激活的炎症细胞对组织、脏器造成的直接损伤,减少炎症细胞产生的炎症介质含量,从而有效保护脏器功能。
第一部分:体外白细胞过滤对健康犬循环血液天然免疫功能的影响
目的:了解静脉-静脉通道的体外白细胞过滤模型对健康犬天然免疫功能的影响,根据白细胞过滤和恢复与时间的对应关系建立相应的浓度-时间曲线方程。
方法:犬静脉麻醉后白细胞过滤组行无菌下双侧颈外静脉穿刺建立体外白细胞过滤端口,通过输血导管和白细胞过滤器将犬行体外白细胞过滤。对照组除不建立体外白细胞过滤管道通路,其余操作相同。以开始白细胞过滤为起始时间,检测白细胞过滤组犬0h、1h、2h、6h及对照组相对应时间点的平均动脉压、心率、体温、血浆TNF-α浓度、IL-6浓度、IL-10浓度、中性粒细胞CD11/18与单核细胞CD14表达。根据设定的16个时间点的白细胞浓度绘制白细胞浓度-时间曲线,以1h点将曲线分为白细胞过滤曲线和白细胞恢复曲线并行曲线拟合,建立最佳曲线方程。
结果:白细胞过滤组1h、2h、6h相对于0h平均动脉压升高的程度高于对照组(P<0.05),2h相对于0h时心率下降的程度大于对照组(P<0.05),体温低于对照组(P<0.05),白细胞过滤组白细胞浓度低于对照组(P<0.05),白细胞过滤组与对照组红细胞浓度变化无统计学差异,白细胞过滤组血小板浓度低于对照组(P<0.05),白细胞过滤组血浆TNF-α浓度、CD11/18、CD14的表达与对照组无统计学差异,血浆IL-6浓度低于对照组,2h与6h相对于0h时血浆IL-10浓度增高的程度高于对照组(P<0.05)。
白细胞过滤曲线的最佳拟合方程为:y=7.479-0.152x+0.004x2-3.89×10-5x3(R2=0.987)和白细胞恢复曲线的最佳拟合方程为:y=0.943+0.111x-0.001x2+7.27×10-7x3(R2=0.940)。
结论:静脉-静脉通道的体外白细胞过滤可有效降低健康犬白细胞浓度,对犬的血流动力学无影响,不激活犬白细胞天然免疫功能。体外白细胞过滤可能通过减少白细胞浓度抑制全身炎症反应对机体的损伤。
第二部分:体外白细胞过滤对健康犬肺与肝组织的影响
目的:了解静脉-静脉通道的体外白细胞过滤模型对健康犬脏器是否有损伤作用。
方法:犬静脉麻醉后白细胞过滤组行无菌下双侧颈外静脉穿刺建立体外白细胞过滤端口,通过输血导管和白细胞过滤器将犬行体外白细胞过滤。对照组除不建立体外白细胞过滤管道通路,其余操作相同。于6h取肺组织和肝组织,测定两组MPO酶活力,HE染色后行肺组织病理学评分,测定肺与肝NF-kB活性。
结果:白细胞过滤组与对照组肺组织与肝组织MPO酶活力,肺组织病理学评分,肺组织与肝组织NF-kB活性统计学均无差异(P>0.05)。
结论:静脉-静脉通道的体外白细胞过滤未对机体脏器造成损伤。
第三部分:体外白细胞过滤对大肠埃希杆菌型脓毒症犬天然免疫功能的影响
目的:建立大肠埃希杆菌型脓毒症犬模型,了解体外白细胞过滤方法对脓毒症犬天然免疫功能的影响。
方法:大肠埃希杆菌(O111:B4)经静脉注入健康犬体内建立大肠埃希杆菌型脓毒症犬模型。将脓毒症犬随机分为白细胞过滤组和对照组。白细胞过滤组将犬行体外白细胞过滤,对照组除不建立体外白细胞过滤管道通路,其余操作相同。以开始注入大肠埃希氏杆菌点为Oh,开始白细胞过滤时间点为0h。检测白细胞过滤组犬0h、0h、1.5h、5h及对照组相对应时间点的平均动脉压、心率、体温、动脉血气、血浆TNF-α浓度、IL-6浓度、IL-10浓度、中性粒细胞CD11/18与单核细胞CD14表达。取肺肾组织病理镜检,测定肺泡灌沈液中TNF-α、IL-6、IL-10浓度,行细胞计数,测定肺湿/干重比。
结果:白细胞过滤组MAP高于对照组(P<0.05);白细胞过滤组与对照组心率变化无统计学差异;白细胞过滤组体温1.5h相对于0h下降的程度低于对照组(P<0.05);白细胞过滤组RBC浓度、PLT浓度变化与对照组无统计学差异;白细胞过滤组白细胞浓度1.5h相对与0h下降的程度低于对照组(P<0.05);白细胞过滤组pH值、PO2、PCO2、BE、Lac变化与对照组有统计学差异(P<0.05);白细胞过滤组与对照组血清TNF-α浓度、IL-6浓度无统计学差异;白细胞过滤组IL-10浓度高于对照组(P<0.05);CD11/18的表达白细胞过滤组5h相对于0h点下降的程度高于对照组P<0.05);白细胞过滤组CD14的表达低于对照组(P<0.05);白细胞过滤组肺泡灌洗液中TNF-α,IL-6浓度与对照组无统计学差异;白细胞过滤组肺泡灌沈液中IL-10浓度高于对照组,(P<0.05);白细胞过滤组肺泡灌洗液中细胞计数低于对照组(P<0.05);肺组织湿/干重比无统计学差异。
结论:体外白细胞过滤可以有效改善大肠埃希杆菌型脓毒症犬的血流动力学、动脉血气,对血浆中炎症因子无明显影响,可增高血浆中IL-10浓度,降低单核细胞上CD14的表达,可明显降低肺泡灌洗液中细胞计数量,增高肺泡灌沈液中IL-10浓度。