本实验室于2002年用具有明显育性转换特征的水稻温敏核雄性不育系Tb7S为材料，通过抑制性削减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization,SSH)技术筛选减数分裂期的Tb7S幼穗在高温可育和低温不育条件下的差异表达cDNA片段。经SSH富集cDNA片段构建了两个cDNA质粒文库，即Tb7S可育幼穗和不育幼穗的cDNA消减文库。并从可育幼穗cDNA消减文库随机挑取39克隆进行测序，但没有进行ReverseNorthernDot-blot鉴定。 本研究选取上述39个克隆中的37个克隆进行ReverseNorthernDot-blot鉴定，剔除假阳性后，共获得11个差异较明显的阳性克隆。 根据ReverseNorthernDot-blot鉴定的结果，选取差异表达最明显的基因作为转化水稻的目的基因。将选取基因的序列在水稻全长cDNA数据库进行比对，选取与其他水稻基因连续相同的碱基数不超过21个的一段序列作为RNAi干涉片段，并根据这段序列设计RNAi引物，克隆这些基因和RNAi片段。测序表明，已经成功克隆到RNAi片段RiOs243、RiOs183、RiOs371.、RiOs408和基因Os348、Os371、Os183。 选用pTCK303作为实施RNA干涉和过表达策略的植物表达载体，将RNAi片段进行两次酶切连接，分两次连接到载体中，第一次正向连入，第二次反向连入，构建成RNAi植物表达载体pTCK303-RiOs243、pTCK303-RiOs183、pTCK303-RiOs371、pTCK303-RiOs408。将基因Os348、Os371、Os183进行一次酶切连接，连入过表达载体中，构建成过表达载体pTCK303-Os348、pTCK303-Os371.、pTCK303-Os183。 构建完成的RNAi和过表达载体通过农杆菌介导方法转化水稻，经共培养、选择培养、分化培养后得到6株pTCK303-Os371载体转化的T0代植株。提取转化植株的DNA，进行PCR检测，4株扩增出目的条带，结果证明基因Os371已经整合到水稻基因组中。