广西产狗肝菜生药鉴别及药效实验研究

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目的:①对狗肝菜及其易混淆品进行生药鉴别研究。  ②狗肝菜中多糖成分提取工艺研究。  ③狗肝菜保肝护肝有效活性部位的筛选。  方法:①分别从原植物形态,药材性状,显微结构特征(包括根、茎、叶、叶表面和粉末特征),紫外-可见分光光度法对狗肝菜及其易混淆品九头狮子草和红丝线进行比较鉴别研究,对比其间的联系与区别。  ②运用苯酚-浓硫酸法,采用单因素和L9(34)正交实验法考察提取时间、温度、次数和料液比对狗肝菜多糖得率的影响。  ③用CCl4制备小鼠急性肝损伤模型,以血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量为指标,对水、正丁醇、乙酸乙酯和石油醚4个不同极性部位萃取物进行保肝药效学初步筛选;并在此筛选处有效部位的基础上,拟定保肝活性物质,分别用CCl4和D-GalN制备大鼠急性肝损伤模型,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)的生化指标,结合肝组织病理切片,进一步探讨保肝药效物质基础。  结果:①狗肝菜叶卵状椭圆形,叶两面无毛或稍被毛,花序腋生或顶生,聚伞式,多个簇生,总苞多阔倒卵形或近圆形;根横切面可见中柱鞘纤维,髓部不明显;茎内皮层凯氏点;表面片上下表皮细胞壁呈波状弯曲;石油醚提取物270nm和氯仿提取物在429 nm的特征峰等可作为鉴别狗肝菜与九头狮子草和红丝线参考点。  ②狗肝菜多糖得率的最佳提取工艺条件为时间2h,提取2次,温度85℃,料液比1:20;在此最佳工艺条件下狗肝菜多糖得率(3.26±0.3)%。  ③小鼠口服狗肝菜正丁醇部位和水部位可明显抑制CC14造模小鼠血清中ALT、AST和MDA活性的升高、升高SOD活性;水部位保肝作用优于正丁醇部位。拟定的狗肝菜水部位中的多糖能显著降低CC14和D-半乳糖胺所致急性肝损伤大鼠肝血清中ALT、AST的含量;又可降低MDA含量,提高SOD、GSH-PX活性。病理切片显示狗肝菜多糖治疗组肝组织受损程度较模型组明显减轻。  结论:①原植物形态,药材性状,显微结构特征(包括根、茎、叶表面和粉末特征)、紫外-可见分光光度法等方法均具有鉴别狗肝菜及其易混淆品九头狮子草和红丝线的意义。  ②在最佳工艺条件下狗肝菜多糖得率(3.26±0.3)%,并且该工艺简单可行稳定,适用于工业生产。  ③狗肝菜的水和正丁醇萃取物具有保肝作用;水萃取物中的多糖为保肝活性成分;多糖对肝细胞的保护极可能是是通过抗自由基,抑制脂质过氧化机制发挥作用。狗肝菜生药鉴别研究为制定其质量标准提供参考依据,多糖提取工艺及其保肝作用具有值得一步研究开发。
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