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蚯蚓纤溶酶(Earthworm Fibrinolytic Enzyme，EFE)是从蚯蚓体内提取的一类纤维蛋白水解酶。它具有强烈的溶解纤维蛋白及血栓的作用，同时还能激活人体内自身的纤溶系统，因此既能溶解陈旧血栓又能抑制新血栓形成，所以蚯蚓纤溶酶是一种较为理想的溶栓药物。由于蚯蚓纤溶酶是多组分的混合酶，不仅质量不易控制，而且药理药效作用复杂，因此最理想的溶栓药物是分离单一的高效低毒组分。但是，从蚯蚓中直接提取的单组分蚯蚓纤溶酶存在着分离纯化难度大、生产工艺复杂、成本高等问题。所以，本研究的前期工作是利用基因重组技术，将纤溶酶活性最高组分7~#的基因构建成工程菌，期望实现重组表达，进而开发成新的溶栓药物。由于一个蛋白质的基因在何种表达系统中进行最佳的表达，是基因克隆工作中的一个难题。因此有必要采用多种表达载体和表达系统进行筛选，以期获得最佳结果。本研究进行了如下工作：将前期构建的大肠杆菌(E．coli)原核表达系统的温度诱导型非融合表达载体pBV221-EFE诱导表达，通过对诱导条件(OD值和时间)进行优化，提高了EFE的表达量，但产物以包含体形式存在，采用了稀释法、流加法等多种常规复性方法进行复性。利用融合型表达载体pTYB11-EFE融合型表达，对诱导剂IPTG的浓度和诱导温度进行了优化，通过降低诱导温度使产物由包含体变成可溶性融合型产物；利用融合型分泌表达载体pMAL-p2X构建了表达载体pMAL-p2X-EFE-7~#，对诱导时间进行了优化，获得了较高的表达量，但发现产物没有明显的分泌表达，绝大部分是以可溶形式存在于胞内。同时，在毕赤酵母(Pichia pastoris)真核表达系统中利用多拷贝分泌型表达载体pPIC9K进行分泌表达，尝试了不同培养基配方和不同的诱导温度，但表达量仍然低于2.5mg／L。上述的种种努力，没有得到最主要的预期结果，即没有获得具有纤溶活性的表达产物。尽管测序结果证明，克隆序列阅读框架没有发生变化，但是蛋白质中的11个半胱氨酸以及糖链结构是否是影响空间结构和活性的主要原因，还需要进一步研究。