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目的:研究小柴胡汤抗大鼠肝纤维化的效果及其机制。方法:本实验分为两部分。1在体实验动物分组:健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为6组:空白对照组(未处理组),四氯化碳对照组(模型组),小柴胡汤(2.5 g/kg,5 g/kg,10 g/kg)治疗组,水飞蓟宾(阳性药组,50 mg/kg)治疗组。除空白对照组外,其他组别均通过在9周内重复注射50%CCl4(1 ml/kg,橄榄油溶解,腹腔内注射,每周两次)诱导肝纤维化,建立大鼠肝纤维化模型;第6周开始给予治疗组大鼠小柴胡汤颗粒溶液和水飞蓟宾悬液灌胃治疗;于第9周末处死,取血液和活体样本,-80℃保存,备用。血清学指标检测肝功能,HE染色和Masson三色染色法检测各组大鼠肝脏病理改变,免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏HSC活化标记物α平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况,Real-time RT-PCR、Western-Blot检测Nrf2通路Nrf2,Nqo1,GCLC,GCLM,Keap-1,Nqo-1,HO-1等相关指标变化。2离体实验用血清药理学方法制备含药血清,并用含药血清培养大鼠肝星状细胞(HSCT6细胞)。取不同时间点含药血清培养的HSCT6细胞,CCK-8法检测细胞存活率,免疫荧光检测α-SMA蛋白表达,Real-time RT-PCR、Westtern-Blot法检测Nrf2通路Nrf2、Nqo1、GCLC、GCLM、Keap1、HO-1等相关指标变化。采用siRNA转染法处理HSCT6细胞,观察Nrf2基因敲低后小柴胡汤对HSCT6细胞增殖活化的影响。结果:1在体实验:肝功能及肝纤维化程度检测结果显示:CCl4造模后与正常组相比,模型组AST、ALT显著增高,HA,PCIII,LN显著升高,表明反复腹腔内注射CCl4造成了肝损伤并形成肝纤维化;与模型组相比,小柴胡汤组AST、ALT显著降低,表明小柴胡汤能改善CCl4引起的AST、ALT升高,其中小柴胡汤高剂量组(10g/kg)能显著降低血清中HA,PCIII,LN浓度,表明小柴胡汤可以减轻肝纤维化程度;HE染色和Masson染色结果显示:与正常组相比,模型组产生脂肪变性,炎性细胞浸润以及肝纤维化形成;与模型组相比,小柴胡汤各剂量组和水飞蓟宾组均能改善这种病理变化;免疫组化结果显示:与正常组相比,模型组大量表达α-SMA,在治疗4周后,小柴胡汤中、高剂量组α-SMA的表达显著减少;实时荧光定量PCR结果显示:CCl4诱导肝纤维化后,与正常组相比肝脏中的Nrf2、GCLC、GCLM基因表达明显减少,与模型组相比小柴胡汤高剂量组可以提高Nrf2、Nqo1、GCLC、GCLM基因的表达,表明小柴胡汤可以激活Nrf2通路;免疫印迹结果显示:与模型组相比,小柴胡汤中、高剂量组能够显著提升肝脏中Nqo-1,GCLC,GCLM的蛋白表达,同时小柴胡汤高剂量组还能提升肝脏中HO-1的蛋白表达,这与PCR的结果保持一致,进一步说明小柴胡汤激活了Nrf2通路。2离体实验:CCK-8结果显示:10%体积分数小柴胡汤含药血清培育HSCT6细胞24、36、48h的抑制率分别为10.30、14.60、16.50,并在60 h达到最高抑制率20.30%,表明小柴胡汤含药血清能抑制HSCT6细胞的增殖;酶联免疫结果显示:与正常组相比,小柴胡汤含药血清和水飞蓟宾含药血清培养HSCT6细胞60h显著减少Col-I的生成;免疫荧光结果显示:与正常组相比,小柴胡汤组和水飞蓟宾组显著减少α-SMA的表达;实时荧光定量PCR结果显示:与正常组相比,小柴胡汤组显著提高了HSCT6细胞胞核中Nrf2基因以及胞浆中GCLC、GCLM、Nqo-1基因水平,表明小柴胡汤含药血清激活了HSCT6细胞Nrf2通路;免疫印迹结果显示:与正常组相比,小柴胡汤组和水飞蓟宾组显著降低了α-SMA的蛋白表达,小柴胡汤组显著提高了Nrf2、Nqo-1、GCLC、GCLM的蛋白表达,这与PCR结果保持一致;使用siRNA降低HSCT6细胞中Nrf2基因水平后再给予小柴胡汤含药血清培养HSCT6细胞,与阴性转染组相比,细胞中Nrf2、Nqo-1、GCLC、GCLM的蛋白表达显著降低,α-SMA的蛋白表达显著增加,细胞存活率升高,Col-I生成增加。结论:1小柴胡汤改善了由CCl4诱导的慢性肝纤维化模型的肝功能及肝纤维化程度;2小柴胡汤对肝星状细胞活化有抑制作用;3小柴胡汤抗肝纤维化机制和上调Nrf2通路抵抗氧化应激有关。