【摘 要】
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本论文以实验室前期构建的四株酵母转化子:Y(ssa3hsp70缺陷型酵母+构建好含有坛紫菜hsp70(phhsp70)的质粒,补偿表达);YC(ssa3hsp70缺陷型酵母+空质粒,缺陷);B(野生型酵母+构建好含有phhsp
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本论文以实验室前期构建的四株酵母转化子:Y(ssa3hsp70缺陷型酵母+构建好含有坛紫菜hsp70(phhsp70)的质粒,补偿表达);YC(ssa3hsp70缺陷型酵母+空质粒,缺陷);B(野生型酵母+构建好含有phhsp70的质粒,过表达);BC(野生型酵母+空质粒,正常表达)为基础,对phhsp70在酵母中的表达和功能进行验证。phhsp70的表达验证主要利用实时荧光定量PCR技术检测phhsp70mRNA的表达情况。通过构建外标准曲线进行相对定量分析,以18s为内源特异参照基因,对以上四株酵母转化子在持续热激和恢复培养过程中phhsp70的相对表达进行了研究,结果表明:未转化phhsp70的酵母BC/YC没有检测到phhsp70mRNA的表达。phhsp70酵母转化子B/Y在正常条件下phhsp70mRNA就有表达;在持续热激培养过程中,phhsp70mRNA的表达在短时间内就会上调,整个热激过程中呈现一定的节律性;在热激后恢复培养过程中,phhsp70mRNA的表达较低,在正常水平的一半左右。对四株酵母菌株进行高温胁迫培养,以此研究phhsp70的表达对酵母耐热性的影响,结果表明酵母B/Y在高温胁迫下的生长情况与正常情况较为接近,但BC/YC高温胁迫下基本不生长或生长缓慢,转化表达phhsp70可以帮助酵母有效抵抗高温胁迫,同时对酵母在正常温度下的生长也有一定的促进作用。无论在正常培养条件还是热激过程中,phhsp70的表达都能提高抗氧化酶系统的活力,帮助酵母获得一定的耐热性。实验结果提示:转化有phhsp70的酵母,其抗氧化系统在正常生理条件下酶活普遍高于对照组,在热激初期,较高的抗氧化酶活可以减缓活性氧自由基爆发对细胞的伤害;同时,较慢的活性氧累积速度也会使酶活的调控速度减慢。
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