多管藻藻胆体中连接多肽的分析

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本研究以海生红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,通过层析与密度梯度离心两种不同解离条件的方法,分离、纯化制备藻胆体与藻胆蛋白-连接多肽复合体,并使用二维电泳的方法对藻胆体与藻胆蛋白-连接多肽复合体中的连接多肽成分进行分离纯化与分析。在高浓度与低浓度磷酸缓冲液条件下分别浸泡提取完整的藻胆体(PBS)与解离的藻胆蛋白。藻胆体经过密度梯度离心纯化后,稀释磷酸盐浓度,使藻胆体发生部分解离,再次经过密度梯度离心分离得到六聚体藻红蛋白(R-PE)、大于六聚体的R-PE与两种藻蓝蛋白(R-PC)、别藻蓝蛋白(AP)等多种部分解离产物。低浓度磷酸缓冲液条件下制备的解离的藻胆蛋白选用凝胶过滤、离子交换分离得到纯化的各藻胆蛋白组分,并建立了依次使用Middle Fine Sephadex G-150(MFG-150)、Fine Sephadex G-150(FG-150)、DEAE Sepharose-Fast Flow纯化分离制备R-PC、AP与依次使用MFG-150、Sephacryl S-300(S-300)、DEAE Sepharose-Fast Flow分离、纯化制备R-PE的两种技术方法。依次使用液相等电聚焦、尿素变性等电聚焦、SDS-PAGE、二维电泳,对层析与密度梯度离心所制备的藻胆体与藻胆蛋白-连接多肽组分进行分析、制备,分离得到各个组分中所含有的连接多肽条带,测得其等电点(pI)分布在7~9之间,相对分子质量分布在94.0kDa~66.2kDa与35.5kDa~28.8kDa之间。将二维电泳结果进行对比并对所得连接多肽条带进行质谱分析,结果表明在完整藻胆体中含有~85kDa、~75kDa、~65kDa三种不同类型的无色连接多肽和五种pI不同的~35kDa的γ1亚基连接多肽与三种pI不同的~28kDa的γ2亚基连接多肽。~85kDa的连接多肽可能是R-PC、AP之间和R-PC、R-PE之间的连接多肽;~75kDa的连接多肽可能是AP组分内部的连接多肽;~65kDa的连接多肽可能是R-PC、R-PE之间连接多肽;γ亚基为R-PE组分内部的连接多肽。由以上推论可以得出PBS中R-PE、R-PC、AP与各个连接多肽之间的连接模型可能为(此处公式省略)。
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