论文部分内容阅读
研究目的:生物信息学初步分析筛选梅毒螺旋体相关蛋白抗原,血清学方法鉴定梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)相关蛋白的感染依赖性抗原特性,对筛选出的符合感染依赖性抗原属性的Tp0971、Tp0768、Tp0462蛋白进行梅毒血清学诊断及临床判愈的应用评价,为寻求新的梅毒血清学诊断方法奠定基础。研究方法:1、生物信息学软件分析梅毒螺旋体全基因组,初步分析筛选最可能的17个符合感染依赖性抗原特点的候选抗原蛋白,用新西兰兔(活Tp接种组,灭活Tp接种组和空白组)不同实验组兔不同时期血清鉴定初筛抗原是否具有感染依赖性抗原属性,并以不符合感染依赖性抗原属性的外膜蛋白Tp92蛋白作为对照蛋白。2、建立以筛选出的符合感染依赖性抗原特点,具有良好的免疫活性的感染依赖性抗原Tp0971、Tp0768及Tp0462蛋白为基础的间接ELISA法,分别以2138份有详细背景资料的临床血清初步评价3个蛋白的诊断价值,比较以这3个蛋白为基础的间接ELISA法与现有的临床血清学诊断金标准方法TPPA、一种市售的临床商品化梅毒初筛ELISA试剂盒以及一种商品化RPR试剂盒的一致性。评价其可能的诊断价值。3、建立基于感染依赖性抗原Tp0971、Tp0768及Tp0462蛋白的间接ELISA法,同时对60份治疗前后的梅毒血清样本进行平行检测,分别比较Tp0971-ELISA、Tp07681-ELISA、Tp0462-ELISA检测治疗前后血清特异性抗体A450nm值变化是否与RPR检测结果的滴度变化值是否存在正相关性。结果:1、初步筛选鉴定出符合感染依赖性抗原血清学属性的蛋白抗原Tp0971、Tp0768、Tp0134、TP0470及Tp0462。2、以具有良好的免疫活性的感染依赖性抗原Tp0971、Tp0768和Tp0462分别建立的间接ELISA法对2138份临床血清检测的结果显示,其灵敏度分别达到96.4%、96.9%和93.0%,特异度分别为97.7%、95.4%和98.9%,与临床试剂盒TPPA的血清检测结果一致性分别高达97.1%、96.2%和95.9%。同时与丽珠Tp-ELISA初筛试剂盒检测结果相比,一致性分别为95.1%、94.2%和94.0%,kappa值分别为0.902、0.884和0.880。初步证实基于感染依赖性抗原Tp0971、Tp0768和Tp0462分别建立的间接ELISA均具有较高的灵敏度和特异度,与TPPA和丽珠Tp-ELISA检测结果具有较高的一致性,说明符合感染依赖性抗原属性的Tp0971、Tp0768和Tp0462蛋白均具有梅毒临床诊断候选抗原的应用价值。3、通过对60份治疗前后的梅毒血清样本的平行检测,结果显示Tp0971-ELISA、Tp0768-ELISA和Tp0462-ELISA的A450值与RPR滴度值变化均呈正相关(相关系数R分别为0.82,0.52和0.12),其中Tp0971-ELISA有望为探索替代传统的临床判愈试验(RPR、TRUST)的新方法奠定基础。结论:1.梅毒螺旋体Tp0971,Tp0462,Tp0768蛋白符合感染依赖性抗原属性。2.符合感染依赖性抗原属性的Tp0971、Tp0768和Tp0462蛋白均具有梅毒临床诊断候选抗原的潜在应用价值。3.基于梅毒螺旋体Tp0971蛋白建立的ELISA有望成为梅毒临床判愈的新检测方法。