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目的建立人类血小板抗原HPA-1～7和-15的基因分型方法同步PCR-SSP,并以该法调查分析福建省汉族献血者HPA基因频率;建立HPA-15基因分型参考DNA细胞系,即B淋巴母细胞系(BLCLs)。方法(1).检索HPA基因序列,用Primer Premier 5.0设计HPA引物和内参引物(HGHG),每对引物进行BLAST。对HPA各系统和HGHG内参作温度梯度,探索最佳退火温度,用Touch Down调节各HPA系统和HGHG内参的反应体系。(2).经过优化的反应体系对HPA基因型已知的参考DNA标本进行分型,验证方法的准确性,建立同步PCR-SSP。(3).配制引物混合物并分装。用同步PCR-SSP调查160名福建省汉族献血者的HPA基因频率,同时验证该引物混合物的重复性。(4).饥饿培养B95-8细胞至二周左右,收集Epstein-Barr病毒。(5).用PCR-SSP筛选三种HPA-15基因型血标本。EB病毒体外转化血标本B淋巴细胞,建立永生性B淋巴母细胞系(BLCLs)。(6).提取BLCLs基因组DNA,以PCR-SSP和巢式PCR鉴定其HPA-15基因型。鉴定培养3代、10代和15代BLCLs的HPA-15基因型,验证其基因型的稳定性。结果(1).建立的同步PCR-SSP操作简便、快速,准确性和重复性均为100%。(2).福建汉族献血者HPA-3a和HPA-15a基因频率较其它HPA系统a基因低,两者分别为0.5406和0.5531,两系统的杂合子百分率分别为53.13%和45.63%;HPA-4a和-7a基因频率大于0.9999(检测结果为1.0000),HPA-1、-2、-5、-6系统a基因频率均大于0.9500,分别为:0.9938、0.9688、0.9813、0.9625。(3).共建成7株BLCLs,选择4株冻存(HPA-15a/b 2株、HPA-15a/a 1株、HPA-15b/b 1株),BLCLs平均建系时间为八周;实验证明4株BLCLs建系前后HPA-15基因型完全吻合。(4).培养不同代次(3代、10代、15代)的BLCLs细胞系HPA-15基因型完全一致,从而证实BLCLs作为HPA-15基因分型的参考物质稳定可靠。(5).三种HPA-15基因型BLCLs细胞系的建立方便了HPA-15基因分型时的质量控制,复苏后的BLCLs仅需培养一周即可提取DNA,结果准确可靠。结论合理设计引物,优化循环参数和反应体系可以建立HPA基因分型的同步PCR-SSP方法;福建汉族献血者HPA(1～7和15)的基因频率与韩国、越南、台湾等国家和地区的种族相似,与欧洲、非洲、美洲和澳洲等地区的种族差异较大;建立HPA-15基因分型的参考DNA细胞系可行。