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研究一:养阴法治疗射血分数正常心力衰竭的证据分析目的基于GRADE分级系统,整理养阴法治疗射血分数正常心力衰竭的临床随机对照试验并对其证据进行分级,对其有效性和安全性进行Meta分析。方法计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、Embase数据库、Pub Med数据库、The Cochrane Library数据库、OVID数据库等,检索时间均从建库至2019年12月,按照制定的纳排标准筛选及纳入,收集养阴法治疗射血分数正常心力衰竭的随机对照试验,提取相关信息;按照《Cochrane干预措施系统评价手册》中偏倚风险评估工具对纳入的随机对照试验进行偏倚风险评估;使用Rev Man5.3软件进行Meta分析,评价其疗效和安全性,对于分析结果和偏倚风险评估结果,使用GRADE系统对证据质量进行分级。结果最终共纳入符合标准的文献24篇,疗效分析及证据评级结果如下。1有效性(临床疗效评价及证据分级)1.1降低患者死亡率和再住院率(出院后6个月内)相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著降低患者出院后6个月内死亡率[RR=0.3,95%CI(0.08,1.07),P=0.06],但结果并不显著,证据等级为中等质量;降低患者出院后6个月内再住院率[RR=0.5,95%CI(0.31,0.82),P=0.006],证据等级为中等质量。1.2降低BNP和NT-pro BNP相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著降低患者的BNP水平[SMD=-1.39,95%CI(-2.09,-0.68),P=0.0001],证据等级为中等质量;可显著降低患者的NT-pro BNP水平[SMD=-0.33,95%CI(-0.55,-0.11),P=0.004],证据等级为高质量。1.3改善心脏超声相关指标相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著提高患者的舒张早期峰值流速E峰[MD=13.02,95%CI(7.10,18.95),P<0.0001],证据等级为中等质量;显著降低患者的舒张晚期峰值流速A峰[MD=-7.97,95%CI(-13.33,-2.61),P=0.004],证据等级为中等质量;显著提高患者的E/A比值[MD=0.17,95%CI(0.09,0.25),P<0.0001];显著降低患者的左室快速充盈期跨二尖瓣血流速率峰值/舒张早期二尖瓣环水平心肌速率峰值(E/e’)比值[MD=-2.12,95%CI(-3.23,-1.02),P=0.0002],证据等级为中等质量;显著提高患者的左室射血分数(LVEF)[MD=2.52,95%CI(0.59,4.44),P=0.01],证据等级为中等质量;显著降低患者的左室等容舒张时间(IVRT)[MD=-1.82,95%CI(-2.88,-0.75),P<0.0008],证据等级为低质量。1.4增加6分钟步行距离(6Minutes Walking Distance,6MWD)相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著增加患者6分钟步行距离[RR=55.80,95%CI(44.38,67.22),P<0.00001],证据等级为中等质量。1.5降低Lee氏心衰计分相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著降低患者的Lee氏心衰计分[MD=-0.71,95%CI(-1.34,-0.08),P=0.03],证据等级为极低质量.1.6改善心衰患者生活质量相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著降低明尼苏达心衰生活质量量表积分[RR=-3.35,95%CI(-0.53,-1.66),P<0.0001],证据等级为低质量。1.7改善心功能相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著提高患者NYHA心功能改善率[RR=1.22,95%CI(1.03,1.34),P<0.0001],证据等级为中等质量。1.8降低中医证候积分相对于常规西药治疗,养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可显著降低患者的中医证候积分[MD=-3.52,95%CI(-4.40,-2.64),P=0.00001],证据等级为低质量。2.安全性:13篇文献未提及不良反应,8篇文献报道未发生不良反应,另有3篇文献报道了试验过程中出现的不良反应(包括心绞痛1例、心慌1例、头晕3例、短暂脑缺血发作1例,5 min后自行缓解、肝功能受损1例、肾功能受损1例、急性胃肠炎1例、腹胀1例,给予对症处理后症状改善、感冒3例),所有的研究均未报道与试验中药绝对相关的不良反应。结论养阴法治疗射血分数正常心力衰竭可降低患者出院后6个月内再住院率和死亡率、降低BNP和NT-pro BNP、提高E峰、降低A峰、提高E/A比值、降低E/e’比值、提高LVEF、降低IVRT、增加6MWD、降低Lee氏心衰计分、改善心衰患者生活质量、改善心功能、降低中医证候评分等方面优于西药常规治疗,但各自疗效优势GRADE分级从高到低不等,证据尚欠充分;且安全性良好。研究二:养阴舒心方治疗射血分数正常心力衰竭的网络药理学研究目的采用网络药理学分析我院毛静远教授治疗射血分数正常心力衰竭经验方——养阴舒心方的潜在作用靶点和关键通路,探索其临床有效的可能机制及作用靶点。方法计算机检索中药信息数据库包括中药系统药理学数据库(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)、中药百科全书数据库(an Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine,ETCM)、中药综合资源数据库(Traditional Chinese Medicine Integrated Database,TCMID),获得养阴舒心方中十味中药(山萸肉、麦冬、黄精、丹参、瓜蒌皮、枳壳、黄连、半夏、地龙、鳖甲)的化合物成分及其对应的靶点;通过基因名片(Gene Cards)数据库、治疗靶标数据库(Therapeutic Target Database,TTD)获得射血分数正常心力衰竭的靶点;使用韦恩分析工具取交集筛选出养阴舒心方-射血分数正常心力衰竭的共同靶点;使用绘图软件Cytoscape3.7.2构建养阴舒心方-有效成分-靶点关系网,筛选出养阴舒心方治疗射血分数正常心力衰竭的中药药效成分;使用蛋白互作网络(Protein-Protein Interaction,PPI)构建专用的STRING数据库构建养阴舒心方-射血分数正常心力衰竭靶点的PPI网络,导入Cytoscape3.7.2软件中进行拓扑属性分析,以度值(Degree Centrality,DC)为标准排序,初步筛选出养阴舒心方-射血分数正常心力衰竭的核心作用靶点;使用R语言对筛选出的核心作用靶点进行包括生物过程(Biological Process,BP)、分子功能(Molecular Function,MF)、细胞组分(Cells Components,CC)三方面的基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)生物学信号通路富集分析,并将富集分析结果分别绘制成柱状图和富集气泡图,对结果进行可视化处理;最后使用Cytoscape3.7.2软件构建靶点-信号通路网络,按照中心度值(Betweenness Centrality,BC)进行再次排序,得到以信号通路为基础最核心的靶点。结果1.养阴舒心方中活性化合物的筛选通过检索相关数据库共获得活性化合物共771个,其中226个来自山萸肉、202个来自丹参、116个来自半夏、80个来自瓜蒌皮、50个来自麦冬、48个来自黄连、38个来自黄精、5个来自枳壳、3个来自鳖甲、3个来自地龙。2.射血分数正常心力衰竭相关靶点筛选按照既定检索策略共检索到5567个射血分数正常心力衰竭的相关靶点;通过删除重复靶点,最终筛选到疾病相关靶点共3763个。3.养阴舒心方治疗射血分数正常心力衰竭的潜在靶点通过韦恩交集分析,得到共有靶点259个。4.养阴舒心方-有效成分-靶点网络通过Cytoscape3.7.2软件绘图分析,计算出养阴舒心方中各种化合物的平均度值为9.326389,度值排名前10位的化合物为:槲皮素(来自黄连)、腺嘌呤核苷(来自麦冬)、木犀草素(来自丹参)、齐墩果酸(来自麦冬)、丹参酮II A(来自丹参)、柚皮素(来自枳壳)、川陈皮素(来自枳壳)、黄芩素(来自半夏和黄精)、β-谷固醇(来自半夏、黄精、山萸肉)、异隐丹参酮(来自丹参)。以上这些化合物是养阴舒心方治疗射血分数正常心力衰竭的重要药效成分。5.PPI网络分析使用STRING网站对提取的259个共有靶点进行蛋白互作网络构建,得到259个节点、4590条边,平均节点度值为35.6,P<1.0e-16。导入Cytoscape软件进行拓扑分析,初次通过度值>35.6得到94个靶点,再次取相关参数的中位数(度值>46、中心度值>25.54、接近中心性>0.54)进行再次筛选,得34个核心靶点。6.GO富集分析和KEGG富集分析将上述34个核心靶点导入Bioconductor数据库,共获得1730个BP、65个MF和32个CC;KEGG生物学信号通路富集分析:使用R语言运行enrichplot程序包,共获得154个靶点显著富集的生物学信号通路;KEGG网络分析:根据度值和中心度值筛选得到丝裂原活化蛋白激酶1(Mitogen-Activated Protein Kinase1,MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶3(Mitogen-Activated Protein Kinase3,MAPK3)、V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物A(v-rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog A,RELA)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(Serine-threonine Kinase,AKT1)、丝裂原活化蛋白激酶14(Mitogen-Activated Protein Kinase14,MAPK14)、丝裂原活化蛋白激酶8(Mitogen-Activated Protein Kinase8,MAPK8)、AP-1转录因子亚单位(JUN)、AP-1转录因子亚单位(FOS)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(Tumor Narcotic Factor,TNF)这10个核心靶点;在磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(Phosphatidyl-Inositol 3Kinase-serine/threonine kinases,PI3K-Akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MitogenActivated Protein Kinase,MAPK)信号通路、糖尿病并发症相关糖基化终产物-糖基化终产物受体(Advanced Glycation End products-Receptor for Advanced Glycation End products,AGE-RAGE)信号通路、低氧诱导因子-1(Hypoxia Inducible Factor-1,HIF-1)信号通路、肿瘤坏死因子(Tumor Narcotic Factor,TNF)信号通路、白介素-17(Interleukin-17,IL-17)信号通路等20条核心信号通路中发挥作用。结论我院毛静远教授治疗射血分数正常心力衰竭经验方——养阴舒心方中的主要活性化合物有槲皮素、腺嘌呤核苷、木犀草素、柚皮素、川陈皮素、齐墩果酸、丹参酮II A等;预测养阴舒心方治疗射血分数正常心力衰竭的核心靶点MAPK1、MAPK3、NFKB1、RELA、AKT1、MAPK14、JUN、FOS、IL6、TNF等可能通过PI3K-Akt、MAPK、HIF-1、AGE-RAGE、TNF、IL-17等信号通路发挥作用。本研究较为系统探索了养阴舒心方治疗射血分数正常心力衰竭多成分、多靶点、多通路的药理学机制及潜在靶点、共同通路,为下一步研究提供了方向。