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目的：对抗鼻咽癌噬菌体单域抗体HNSA039特异性进行鉴定,构建、表达抗鼻咽癌单域抗体HNSA039和大肠杆菌硫氧还蛋白(TrxA)融合蛋白,并对融合蛋白与硫酸博来霉素(Bleomycin, BLM)偶联物的靶向抗肿瘤特性进行初步研究。方法：利用鼻咽癌细胞系和非鼻咽癌细胞系对单域抗体HNSA039的特异性进行免疫细胞化学鉴定。构建单域抗体HNSA039与大肠杆菌硫氧还蛋白(TrxA)融合基因的原核表达载体pET-21 a(+)/TrxA-HNS A039,转化大肠杆菌BL21 (DE3),进行IPTG诱导表达。在变性条件下纯化融合蛋白TrxA-HNSA039,进行SDS-PAGE电泳鉴定和酶联免疫吸附法(ELISA)检测融合蛋白的免疫活性。以葡聚糖T40为中介体偶联融合蛋白TrxA-HNSA039与BLM,利用流式细胞周期分析、MTT、克隆形成实验检测其对鼻咽癌细胞系(CNE2)和人肺癌细胞系(A549)的抗肿瘤效应。结果：通过对噬菌体重链单域抗体HNSA039的免疫细胞化学鉴定,发现单域抗体HNSA039与CNE2呈较强阳性反应,而与其它人肿瘤细胞系和正常细胞系反应呈弱阳性或不反应。成功构建的重组表达载体pET-21 a(+)/TrxA-HNS A039,经IPTG诱导后表达形式分析显示,融合蛋白主要以包涵体的形式存在,SDS-PAGE电泳显示分子量大约为23KD；ELISA结果显示融合蛋白与CNE2具有较好的结合活性。通过流式细胞周期分析、MTT、克隆形成实验检测TrxA-HNSA039与硫酸博来霉素偶联物(TrxA-HNSA039-BLM)的抗肿瘤活性,结果显示偶联物的抗肿瘤活性比抗体药物混合物抗肿瘤活性显著下降,差别有统计学意义(P<0.05),而对靶细胞系(CNE2)和人肺癌细胞系(A549)抗肿瘤活性差别没有统计学意义(P>0.05)。结论：免疫细胞化学结果显示单域抗体HNSA039具有较好的鼻咽癌细胞特异性。成功构建TrxA-HNSA039的原核表达载体,然后表达并纯化TrxA-HNSA039融合蛋白。ELISA实验结果显示,融合蛋白TrxA-HNSA039具有较好的识别鼻咽癌细胞的免疫活性,而体外细胞实验结果显示TrxA-HNSA039-BLM没有明显的靶向抗鼻咽癌活性。为了更好地研究单域抗体HNSA039,我们准备融合单域抗体HNSA039基因或将单域抗体融合其它抗原识别结构,构建双价抗体增加其抗原识别特性,与“弹头”药物进行直接偶联进行靶向抗鼻咽癌研究。