SIRT1在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用研究

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卵泡闭锁是雌性哺乳动物卵巢内普遍存在的生理现象,卵巢内的卵泡除少数能成熟排卵外,大多数的卵泡在生长发育过程中经历闭锁退化。在母猪这样的多胎动物中,卵泡闭锁调控影响其排卵率及产仔数,因此卵泡闭锁调控的研究具有重要的生产意义及经济价值。卵泡闭锁是一个受内分泌调控的极其复杂的生理过程;其主要机制是颗粒细胞凋亡。SIRT1(The Silent Information Regulator1)是组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase,HDAC)第三类成员之一,广泛存在于动物细胞中,在基因沉默、细胞周期调节、脂肪酸代谢等诸多细胞活动中发挥作用;且SIRT1在细胞凋亡中发挥重要的调控作用,其作用机理也正被一步步的报道阐述。根据国内外的相关报道,本研究针对SIRT1在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用进行探讨,为探索卵泡闭锁调控机制的研究提供依据。本研究选用母猪卵巢作为试验材料,一方面利用免疫组织化学检测SIRT1在母猪卵巢中的表达;分别分析卵巢不同细胞、不同发育阶段卵泡及不同闭锁程度卵泡中SIRT1的表达;并用荧光定量法检测不同发育阶段及不同闭锁程度的卵泡中SIRT1的表达情况。另一方面利用体外培养猪卵巢颗粒细胞,分别用SIRT1的激活剂(RES)、抑制剂(NAM)处理培养的猪卵巢颗粒细胞,不含血清的培养基诱导细胞凋亡,用流式细胞仪检测不同处理组的细胞凋亡情况;用MTT法检测不同处理组的细胞增殖情况。本论文研究结果及结论如下:SIRT1在猪卵巢卵母细胞、颗粒细胞、膜细胞、黄体细胞中均检测到表达,其中颗粒细胞中的表达丰度显著高于膜细胞;部分黄体细胞中检测到SIRT1的表达;在间质细胞中几乎不表达;且SIRT1在卵巢组织细胞中的亚细胞定位为细胞核。SIRT1在猪卵巢不同发育阶段卵泡中的表达呈现差异性;在3~1.5mm泡中的表达量最高,随着卵泡的继续发育表达量下降;并且在闭锁卵泡中的表达高于健康卵泡,暗示SIRT1在颗粒细胞凋亡中起重要作用。用体外培养颗粒细胞进一步探讨SIRT1与颗粒细胞凋亡的关系;抑制SIRT1的表达,细胞凋亡率显著下降,细胞增殖率上升;SIRT1表达增强细胞凋亡率显著上升,细胞增殖率下降;总结全文,SIRT1可能通过促进颗粒细胞凋亡参与猪卵泡闭锁的调控。
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