蛋白质和芳香醇同系物在疏水色谱中保留的热力学研究

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全文分为四个部分。 一、流动相组成对溶质在疏水相互作用色谱中保留的影响 首次研究了疏水相互作用色谱(HIC)中芳香醇同系物在四种盐流动相中的保留行为,并对蛋白质在HIC中的保留行为进行了研究。发现芳香醇同系物在0~80℃温度范围内及不同盐的流动相中都遵循计量置换保留模型和同系物规律,蛋白质分子在0~50℃温度范围内的保留行为也遵循计量置换保留模型。流动相组成对这两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响不同。比较了小分子和生物大分子在不同盐溶液中的Z值变化,发现流动相中的盐仅改变小分子与固定相的水合程度,而对生物大分子,除改变其与固定相的水合程度外,还会影响生物大分子与固定相接触区域的分子构象。 二、芳香醇同系物在HIC保留过程中的浓度收敛和碳数收敛 在研究温度范围内,芳香醇同系物在HIC中的保留值随着色谱条件及溶质本身的结构参数的变化,在四种盐流动相中都存在碳数收敛和浓度收敛现象,并求得各实验条件下收敛点的坐标,阐明了收敛点的物理意义。 三、芳香醇同系物和蛋白质在HIC中保留的热力学研究 首次研究了温度对芳香醇同系物在HIC中保留的影响,发现在0~80℃温度范围内芳香醇同系物的保留值随着温度的升高,先增大而后减小。用Van’t Hoff平方方程对芳香醇同系物在HIC中的保留值进行拟合,并求得其热力学参数。发现芳香醇同系物的保留在低温时由熵控制,而在高温时由焓控制。用同样的方法还求得蛋白质在HIC中保留热力学参数,结果表明在实验温度范围内蛋白质的保留是由熵控制。除△G°外,所有溶质其他三个热力学参数(焓变△H°、熵变△S°和热容量变△C_n~°)均与绝对温度的倒数间存在良好的线性关系。 四、芳香醇同系物和蛋白质在HIC保留溅中的恰嫡补偿 利用超热力学理论中的(MurphyPrivalov-Gill)MPG作图首次求得芳香醇同系物在HIC保留过程中的等热力学温度,从而证实了不同流动相中芳香醇同系物的保留机理相同。计算了芳香醇同系物和蛋白质在各实验温度范围内的洛嫡补偿温度,证实脑嫡补偿温度是实验温度的函数。芳香醇同系物和蛋白质的烩.嫡补偿温度所遵循的函数关系式不同,表明两者在HIC 中保留机理不同。在”SK下,求得蛋白质在*C中的补偿温度为”6K,接近于文献中报道的蛋白质变性的补偿温度 293K。
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